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購(gòu)買國(guó)外細(xì)胞株應(yīng)該注意的事項(xiàng)

[2010/11/24]

 

由于現(xiàn)在國(guó)內(nèi)的細(xì)胞庫(kù)資料不是很充足,而且比較零散,包括建株時(shí)的技術(shù)層面不一,沒(méi)有比較嚴(yán)格統(tǒng)一的操作規(guī)范,所以在遇到比較重要的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目時(shí),一般都比較傾向于購(gòu)買國(guó)外的細(xì)胞株,但購(gòu)買國(guó)外細(xì)胞株需要考慮的因素有如下幾點(diǎn):

1、細(xì)胞株的生物等級(jí),由于有些細(xì)胞株及菌株屬于管制品,所以從國(guó)外購(gòu)貨比較麻煩。

2、在購(gòu)買國(guó)外細(xì)胞株時(shí),需交待國(guó)外加比較多的干冰(一般在13公斤以上,采用比較密封的泡沫盒加套紙箱。

3、報(bào)關(guān)時(shí)盡量提供比較充足的證明材料,以免擔(dān)擱時(shí)間而導(dǎo)致干冰揮發(fā)完細(xì)胞株死亡,甚至于被退回給發(fā)貨人。

4、如果通過(guò)國(guó)外細(xì)胞株在國(guó)內(nèi)的代理商購(gòu)買的話,合同中需注明以下一些內(nèi)容:

a.明確的到貨時(shí)間,這個(gè)時(shí)間需注明的是工作日,還是普通日。

b.采用什么樣的運(yùn)輸方法?

c.如果屬于技術(shù)外的因素而細(xì)胞株無(wú)法培養(yǎng)活,供方需負(fù)什么樣的責(zé)任?

d.細(xì)胞株的詳細(xì)資料,以及細(xì)胞株的代數(shù),其中,ATCC的細(xì)胞株一般都在幾十代,這個(gè)需要與國(guó)外確認(rèn),IST-Banca可與他們的代理商聯(lián)系索取詳細(xì)資料!

e.需在合同中注明原裝進(jìn)口,避免相關(guān)公司魚龍渾雜,從國(guó)外購(gòu)買回一株細(xì)胞株,經(jīng)過(guò)培養(yǎng)傳代后,同時(shí)供應(yīng)給幾個(gè)人;一般國(guó)外進(jìn)口的細(xì)胞株都會(huì)有原裝的凍存管,而且每一支凍存管上都會(huì)有批號(hào),而且每次的批號(hào)都不一樣。

f.在決定購(gòu)買細(xì)胞株之前,必須仔細(xì)閱讀他們的培養(yǎng)信息,所謂“細(xì)胞株未到,培養(yǎng)基先行一步”。

g.在接到細(xì)胞株后,最好要求供應(yīng)公司的人員現(xiàn)場(chǎng)參與,從而用于確認(rèn)責(zé)任。

h.在培養(yǎng)前,請(qǐng)確認(rèn)您的二氧化碳培養(yǎng)箱二氧化碳濃度的準(zhǔn)確性,國(guó)外的細(xì)胞株建議用進(jìn)口的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,比如:orange,corning, falcon品牌的培養(yǎng)瓶。

i.詢問(wèn)你的代理商或者經(jīng)銷商,接到細(xì)胞株后是否需要離心置換出DMSO,因?yàn)橛行┘?xì)胞廠家建議不要離心,他們會(huì)認(rèn)為離心而導(dǎo)致的碎片比DMSO產(chǎn)生毒性的害處更大,如果可以離心,轉(zhuǎn)速不要過(guò)高,一般都在1000轉(zhuǎn)以下,此處需要注意,因?yàn)橛械墓緯?huì)拿這一點(diǎn)來(lái)拒絕索賠!

j.培養(yǎng)基的服務(wù),仔細(xì)與供應(yīng)商確認(rèn)培養(yǎng)基的品牌及份量,以免供應(yīng)商以些理由來(lái)推翻你索賠的理由。

k.在細(xì)胞株復(fù)蘇時(shí),一定要先想好步驟再做,一步一步來(lái)做,避免導(dǎo)致操作中的污染,復(fù)蘇是一個(gè)非常重要的步驟,往往容易導(dǎo)致污染,然后為污染所導(dǎo)致的雜質(zhì)而傷透腦筋。

細(xì)胞運(yùn)輸中,還要注意細(xì)胞株的反復(fù)凍融情況,有的供應(yīng)商在供應(yīng)細(xì)胞株或者培養(yǎng)基時(shí),特別是需要低溫保存的培養(yǎng)基時(shí),通常會(huì)出現(xiàn)運(yùn)輸溫度與儲(chǔ)存溫度的差別,而導(dǎo)致培養(yǎng)基或細(xì)胞株融掉后又放進(jìn)低溫冰箱進(jìn)行凍存,然后再快遞給我們,特別是血清類制品,如果在接到培養(yǎng)基并解凍后,沉淀和絮狀物較多時(shí),那就要懷疑是否是這種情況!

對(duì)于所買回來(lái)的細(xì)胞簽別,除了顯微鏡下的形態(tài)學(xué)觀察,還有就是特異性實(shí)驗(yàn),這也是比較重要的!細(xì)胞株有些時(shí)候復(fù)蘇后剛培養(yǎng)的時(shí)候,老師們發(fā)現(xiàn)從形態(tài)上判斷似乎不是自己所需要的細(xì)胞株,于是我就建議他做細(xì)胞屬性的特異性實(shí)驗(yàn),ATCC的技術(shù)資料最后面附有細(xì)胞株的代數(shù),以及細(xì)胞株經(jīng)過(guò)了哪些檢測(cè),細(xì)胞株特異性實(shí)驗(yàn)的方法,從而用以確認(rèn)真正是自己所需要的細(xì)胞株!凍存的細(xì)胞株,特別是從國(guó)外進(jìn)口的細(xì)胞株,應(yīng)該立即復(fù)蘇,盡量不要再凍存,反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞株復(fù)蘇后的活性低!第一次接種培養(yǎng)時(shí),應(yīng)以進(jìn)口的25平方厘米的培養(yǎng)瓶為佳,現(xiàn)在市面上的主要有orange,cornig,BD(Falcon),其中orange價(jià)格比較公道5-6元/個(gè),BD(Falcon)最貴10元左右每個(gè),BD的產(chǎn)品一般用于醫(yī)院生殖中心實(shí)驗(yàn)室人工受精卵的一到三代培養(yǎng)!ATCC的細(xì)胞株培養(yǎng)基分為完全培養(yǎng)基(原代培養(yǎng)),次培養(yǎng)基(傳代培養(yǎng)基),請(qǐng)大家要注意!

如果細(xì)胞運(yùn)來(lái)后,應(yīng)該馬上進(jìn)行復(fù)蘇,復(fù)蘇時(shí),迅速投入37攝氏度水浴中并不斷振搖,使之迅速融化,離心應(yīng)在1000轉(zhuǎn)/分以下,如果太高速會(huì)使本來(lái)脆弱的細(xì)胞產(chǎn)生較多的碎片,培養(yǎng)過(guò)程中,甚至?xí)驗(yàn)樗槠霈F(xiàn)黑點(diǎn)(一般都是800r/min,5min),棄上清液,以去除二甲基亞砜。加入先前配好的培養(yǎng)基,并在50ml培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。