離心機(jī)使用注意事項(xiàng)

　　一. 離心機(jī)在預(yù)冷狀態(tài)時(shí)，離心機(jī)蓋必須關(guān)閉，離心結(jié)束后取出轉(zhuǎn)頭要倒置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，擦干腔內(nèi)余水，離心機(jī)蓋處于打開(kāi)狀態(tài)。

　　二. 轉(zhuǎn)頭在預(yù)冷時(shí)轉(zhuǎn)頭蓋可擺放在離心機(jī)的平臺(tái)上，或擺放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，千萬(wàn)不可不擰緊浮放在轉(zhuǎn)頭上，因?yàn)橐坏┱`啟動(dòng)，轉(zhuǎn)頭蓋就會(huì)飛出，造成事故!

　　三. 轉(zhuǎn)頭蓋在擰緊后一定要用手指觸摸轉(zhuǎn)頭與轉(zhuǎn)蓋之間有無(wú)縫隙，如有縫隙要擰開(kāi)重新擰緊，直至確認(rèn)無(wú)縫隙方可啟動(dòng)離心機(jī)。

　　四. 在離心過(guò)程中，操作人員不得離開(kāi)離心機(jī)室，一旦發(fā)生異常情況操作人員不能關(guān)電源POWER)，要按STOP。在預(yù)冷前要填寫好離心機(jī)使用記錄。

　　五. 不得使用偽劣的離心管，不得使用老化、變形、有裂紋的離心管。

　　六. 在節(jié)假日和晚間最后一個(gè)使用離心機(jī)例行安全檢查后方能離去。七. 在儀器使用過(guò)程中發(fā)生機(jī)器故障，部件損壞情況時(shí)要及時(shí)與技術(shù)人員聯(lián)系。

　　運(yùn)行注意事項(xiàng)

　　為了確保安全和離心效果，儀器必須放置在堅(jiān)固水平的臺(tái)面上，工程塑料蓋門上不得放置任何物品;樣品必須對(duì)稱放置，并在開(kāi)機(jī)前確保已擰緊螺母。

　　使用前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)子是否有傷痕、腐蝕等現(xiàn)象，同時(shí)應(yīng)對(duì)離心杯做裂紋、老化等方面的檢查，發(fā)現(xiàn)有疑問(wèn)立即停止使用，并與廠方聯(lián)系;開(kāi)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)前請(qǐng)務(wù)必?cái)Q緊轉(zhuǎn)頭的壓緊螺帽，以免高速旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)頭飛出造成事故。

　　轉(zhuǎn)速設(shè)定不得超過(guò)最高轉(zhuǎn)速，以確保機(jī)器安全運(yùn)轉(zhuǎn)。

　　使用中如果出現(xiàn) 0.00或其他數(shù)字，機(jī)器不運(yùn)轉(zhuǎn)，應(yīng)關(guān)機(jī)斷電，10秒后重新開(kāi)機(jī)，待所設(shè)轉(zhuǎn)速顯示后，再按運(yùn)轉(zhuǎn)鍵，機(jī)器將照常運(yùn)轉(zhuǎn)。

　　如需分離樣品的比重超過(guò) 1.2克/立方厘米，最高轉(zhuǎn)速N必須按下式修正：N=N MAX *(1.2/樣品比重) 1/2 ，N MAX =轉(zhuǎn)子極限轉(zhuǎn)速。

　　不得在機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程中或轉(zhuǎn)子未停穩(wěn)的情況下打開(kāi)蓋門，以免發(fā)生事故。

　　離心杯必須等量灌注樣品，切不要使轉(zhuǎn)頭在不平衡的狀況下運(yùn)行。

　　離心機(jī)一次運(yùn)行最好不要超過(guò) 60分鐘。

　　離心機(jī)必須可靠接地;機(jī)器不使用，請(qǐng)拔掉電源插頭。

　　使用注意事項(xiàng)

　　※1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)。

　　※2、安放離心機(jī)的地面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，二只調(diào)平螺桿調(diào)節(jié)使離心機(jī)與地面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振動(dòng)。

　　※3、離心管加液應(yīng)稱量平衡，若加液差異過(guò)大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心

　　試管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入。

　　※4、若運(yùn)行時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。

　　※5、每次停機(jī)后再開(kāi)機(jī)的時(shí)間間隔不得少于5分鐘，以免壓縮機(jī)堵轉(zhuǎn)而損壞。

　　※6、每次離心完成后，必須將轉(zhuǎn)子取出，否則長(zhǎng)時(shí)間放在軸上，可能銹死，轉(zhuǎn)子會(huì)取不出而造成離心機(jī)整機(jī)報(bào)廢。

　　※7、電源必須有接地線。

　　※8、本機(jī)轉(zhuǎn)子使用壽命為三年，過(guò)期應(yīng)更換轉(zhuǎn)子。

　　※9、所有轉(zhuǎn)子不能超過(guò)其最高轉(zhuǎn)速使用。

　　離心機(jī) 是借離心力分離液相非均一體系的設(shè)備。根據(jù)物質(zhì)的沉降系數(shù)、質(zhì)量、密度等的不同，應(yīng)用強(qiáng)大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮和提純的方法稱為離心。一般說(shuō)， 離心機(jī)轉(zhuǎn)速在 20 000r/min 以上的稱為超速離心。離心技術(shù)，特別是超速離心技術(shù)是分子生物學(xué)、生物化學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的手段。

　　1924 年 T.Svedberg 和 Rinde 研制出世界上第一臺(tái)渦輪超速離心機(jī)以來(lái)，發(fā)展非常迅速，現(xiàn)在已廣泛地應(yīng)用到科學(xué)研究和生產(chǎn)的各個(gè)領(lǐng)域。現(xiàn)在離心機(jī)轉(zhuǎn)頭最高轉(zhuǎn)速已達(dá) 100000 r/min ，最大離心力達(dá) 700 000 g 。

　　離心機(jī) 作為一種手段，具有許多優(yōu)點(diǎn)。例如，超速離心可在低溫下操作，保護(hù)了生物大分子的活性。制備型的離心機(jī)負(fù)載量大，一次可分離提純幾克樣品，比層析、電泳上的樣品量大得多。分析離心機(jī)不僅可測(cè)物質(zhì)的分子量，還可檢驗(yàn)物質(zhì)的純度、構(gòu)象、沉降系數(shù)等。因此離心技術(shù)在生物學(xué)研究中占有重要的地位，是分離、純化細(xì)胞、病毒、蛋白、核酸和酶的最方便最有效的工具。

　　( 二 ) 離心原理

　　當(dāng)含有細(xì)小顆粒的懸浮液靜置不動(dòng)時(shí)，由于重力場(chǎng)的作用使得懸浮的顆粒逐漸下沉。粒子越重，下沉越快，反之密度比液體小的粒子就會(huì)上浮。微粒在重力場(chǎng)下移動(dòng)的速度與微粒的大小、形態(tài)和密度有關(guān)，并且又與重力場(chǎng)的強(qiáng)度及液體的粘度有關(guān)。象紅血球大小的顆粒，直徑為數(shù)微米，就可以在通常重力作用下觀察到它們的

　　沉降過(guò)程。

　　此外，物質(zhì)在介質(zhì)中沉降時(shí)還伴隨有擴(kuò)散現(xiàn)象。擴(kuò)散是無(wú)條件的絕對(duì)的。擴(kuò)散與物質(zhì)的質(zhì)量成反比，顆粒越小擴(kuò)散越嚴(yán)重。而沉降是相對(duì)的，有條件的，要受到外力才能運(yùn)動(dòng)。沉降與物體重量成正比，顆粒越大沉降越快。對(duì)小于幾微米的微粒如病毒或蛋白質(zhì)等，它們?cè)谌芤褐谐赡z體或半膠體狀態(tài)，僅僅利用重力是不可能觀察到沉降過(guò)程的。因?yàn)轭w粒越小沉降越慢，而擴(kuò)散現(xiàn)象則越嚴(yán)重。所以需要利用離心機(jī)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，才能迫使這些微粒克服擴(kuò)散產(chǎn)生沉降運(yùn)動(dòng)。

　　離心就是利用離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強(qiáng)大的離心力，加快液體中顆粒的沉降速度，把樣品中不同沉降系數(shù)和浮力密度的物質(zhì)分離開(kāi)。離心力 (F) 的大小取決于離心轉(zhuǎn)頭的角速度 ( ω ， r/min) 和物質(zhì)顆粒距離心軸的距離 (r ， cm) 。它們的關(guān)系是： F = ω 2R

　　為方便起見(jiàn)， F 常用相對(duì)離心力也就是地心引力的倍數(shù)表示。即把 F 值除以重力加速度 g ( 約等于9.8m/s2.) 得到離心力是重力的多少倍，稱作多少個(gè) g 。例如離心機(jī)轉(zhuǎn)頭平均半徑是 6cm ，當(dāng)轉(zhuǎn)速是 60 000

　　r/min 時(shí)，離心力是 240 000 × g ，表示此時(shí)作用在被離心物質(zhì)上的離心力是日常地心引力的 24 萬(wàn)倍。因此，轉(zhuǎn)速 r/min 和離心力 g 值之間并不是成正比關(guān)系，還和半徑有關(guān)。同樣的轉(zhuǎn)速，半徑大一倍，離心力 (g 值 ) 也大一倍。轉(zhuǎn)速 (r/min) 和離心力 (g 值 ) 之間的關(guān)系可用下式換算：

　　式中： r 為半徑 (cm) ， g 為離心力 (g 值 )

　　(三 ) 超速離心機(jī)的離心方法

　　用離心方法分離生物大分子和亞細(xì)胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們?cè)谝后w介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶，或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開(kāi)。前者是沉降速度法，應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要小于樣品中最小顆粒的密度，離心時(shí)選用高轉(zhuǎn)速和短時(shí)間;后者是沉降平衡法，應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的最大密度要大于樣品中最小顆粒的密度，離心時(shí)選用較低轉(zhuǎn)速和較長(zhǎng)時(shí)間。實(shí)際操作有幾種形式：

　　1. 差速離心這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心，分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液，在高速離心上清沉降中等顆粒，最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級(jí)提高離心力分離上情液的方法，把不同大小的顆粒分開(kāi)。

　　這種方法比較簡(jiǎn)單，方便。分離的組份沉到管底，因此可以迅速濃縮所要的組份，減少體積。但回收率和純度是有矛盾的，要提高回收率，勢(shì)必提高轉(zhuǎn)速或延長(zhǎng)離心時(shí)間，這樣大小相近的顆粒也會(huì)沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。

　　2. 速度區(qū)帶 ( 或速度梯度 ) 離心 本法是將樣品放在一個(gè)連續(xù)的密度梯度液體上，通過(guò)離心，大顆粒沉降快，小顆粒沉降慢。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子，因此把各種組份分開(kāi)來(lái)。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì)，如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多，但分子量不一樣，用本法很容易將其分

　　開(kāi)。但對(duì)密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液 (5%-60%) 配成梯度，用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個(gè)組份。

　　(四)保養(yǎng)注意事項(xiàng)

　　1.清潔離心機(jī)腔體和轉(zhuǎn)頭，并擦干腔內(nèi)冷凝水。

　　2.使用完后要打開(kāi)門，直至腔內(nèi)恢復(fù)常溫。

　　3.離心之前要平衡樣品。

　　4.離心之后要注意消毒和滅菌。

　　5.根據(jù)需要選用tubes/bottles、adapters以及spacers，根據(jù)要求加樣品量。

　　6.必要時(shí)預(yù)冷轉(zhuǎn)子。

　　7.轉(zhuǎn)頭的維護(hù)和存放,注意保護(hù)底部的計(jì)數(shù)環(huán)。

　　8.工具的準(zhǔn)確使用和轉(zhuǎn)頭的正確安裝。