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親和色譜的載體選擇

[2012/11/5]

  用于親和色譜的理想載體應(yīng)具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵滲透性:疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),容許大分子自由通過;⑶有一定硬度,最好為均一的珠狀;⑷具有大量可供反應(yīng)的化學(xué)基團,能與大量配基共價連接;⑸非特異性吸附能力極低;⑹能抗微生物和酶的侵蝕;⑺有較好的化學(xué)穩(wěn)定性;⑻親水性。選擇配基根據(jù)對純化大分子的特異性的全面認識。

  選擇也的配基有兩條標準:第一是蛋白質(zhì)和配基之間必須有強的親和力,解離常數(shù)在5mM以上不是好配基;相反親和力太高也是有害的,因為在解離蛋白質(zhì)──配基復(fù)合物時所需的條件就要強烈,這樣可能使蛋白質(zhì)變性。例如用抗生物素蛋白作配基純化含生物素的羧化酶時,生物素──抗生物素蛋白復(fù)合物的解離常數(shù)達10-15M,解離時需要pH1.5,6M鹽酸胍,在這種條件中。羧化酶大多數(shù)已經(jīng)變性。選擇配基的第二個標準是,配基必須具有適當?shù)幕瘜W(xué)基團,這種基團不參與配基與蛋白質(zhì)之間特異結(jié)合,但可用于活化和載體相連接,同時又不影響配基與蛋白質(zhì)之間的親和力。

  瓊脂糖凝膠親水性強,理化性質(zhì)穩(wěn)定(商品名:Sepharose);聚丙烯酰胺凝膠理化性質(zhì)穩(wěn)定,耐有機溶劑及去污劑,抗微生物能力強,特別適應(yīng)用配基與提取物親和力比較弱的物質(zhì)。葡聚糖凝膠:有良好的化學(xué)及物理性質(zhì),孔經(jīng)小。纖維素非特易吸附嚴重,廉價,易得。