豬血又稱液體肉、血豆腐和血花等，味甘、苦，性溫，有解毒清腸、補(bǔ)血美容的功效。豬血富含維生素B2、維生素C、蛋白質(zhì)、鐵、磷、鈣、尼克酸等營養(yǎng)成分。

　　建立豬血清中依維菌素(ivermectin)的高效液相色譜測定方法。方法：以0。05 偏磷酸-甲醇(7：3)沉淀豬血清蛋白后用乙酸乙酯提取依維菌素，離心后取上清液用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器揮干溶劑，用甲醇溶解殘?jiān)筮M(jìn)樣分析。色譜柱為反相柱(5μm，250mm×4.6mm)，流動(dòng)相為甲醇-水(90：10)，流速1ml/min，紫外檢測波長為245nm 結(jié)果方法檢出下限為0.010mg/L，線性范圍為0.010～20mg/L，相對標(biāo)準(zhǔn)差為0.78%～3.82%，加標(biāo)回收率為94.0%～100.O%。結(jié)論本法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于豬血清中微量依維菌素的測定。

　　「關(guān)鍵詞」高效液相色譜法;豬血清;依維菌素

　　依維菌素是一種新型高效廣譜抗寄生蟲藥，對線蟲、昆蟲和螨蟲等均有驅(qū)殺作用，可用于防治家畜和寵物的寄生蟲病。其在體內(nèi)有一定的蓄積性，人食用了這些家畜肉制品后，依維菌素會對人體健康產(chǎn)生危害。因此，需測定動(dòng)物血清中依維菌素的含量。對于基體簡單的樣品如藥片和注射液中依維菌素含量的測定可用紫外分光光度法和高效液相色譜法。血清樣品基體復(fù)雜，干擾成分多，其測定相對困難，國外已有熒光衍生-HPLC法的報(bào)道，該法靈敏度高，但衍生化步驟繁瑣，分析成本較高。本研究利用0.05%偏磷酸-甲醇(7：3，V/V)沉淀血清蛋白、乙酸乙酯提取其中微量依維菌素，高效液相色譜法測定含量，取得了較為滿意的結(jié)果。

　　1 材料與方法

　　1。1 主要試劑及儀器

　　甲醇(色譜純);乙酸乙酯(分析純);偏磷酸(分析純);依維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取0.0500g依維菌素(中國獸藥監(jiān)察所提供，批號KY31297)于25ml容量瓶中，加甲醇溶解定容，此液質(zhì)量濃度為2.00mg/ml。臨用前，用甲醇稀釋成應(yīng)用液。本實(shí)驗(yàn)用水均為純水。

　　液相色譜儀;反相色譜柱：5μm，250mm×4.6mm;色譜保護(hù)柱;紫外可見分光光度計(jì);離心機(jī);旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器。

　　1。2 實(shí)驗(yàn)方法

　　1。2。1 色譜條件 流動(dòng)相：甲醇-水(90：1O)，流速1ml/min，柱溫25℃，反相C18色譜柱(5μm，250mm×4.6mm)分離，紫外檢測波長為245nm。

　　1。2。2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取依維菌素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液用甲醇稀釋成0.10mg/L，0.25mg/L，0.50mg/L，1.O0mg/L，2.50mg/L，在儀器基線達(dá)到平直后，分別進(jìn)樣20μl。依維菌素保留時(shí)間為17.0min左右。以進(jìn)樣量(X，ng)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸方程。本標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=1.75X一0.12，r=0.9994。

　　1。2。3 樣品處理及測定 取豬血清1.00ml置于10ml離心管中，加0.05%偏磷酸-甲醇(7：3，V/V)1.00ml，漩渦混勻，加4.00ml乙酸乙酯振搖200次提取，4000r/min離心5min。吸取乙酸乙酯層3.O0 ml于10ml離心管中，于40℃水浴下用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器揮干。加0.20ml甲醇旋渦振蕩1min并超聲1min溶解，4000 r/min離心5min后取上清液進(jìn)樣100μl。

　　2 結(jié)果與討論

　　2。1 色譜條件的優(yōu)化

　　2。1。1 檢測波長的選擇 在200nm～400nm范圍內(nèi)，用UV-260紫外可見分光光度計(jì)對依維菌素進(jìn)行紫外掃描，其在245nm及238nm均有峰值吸收，本法選擇245nm為檢測波長。

　　2。1。2 流動(dòng)相中甲醇比例的選擇 改變流動(dòng)相中甲醇與水的比例，觀察保留時(shí)間及峰形的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，流動(dòng)相中甲醇含量對依維菌素保留時(shí)間影響較大。甲醇含量從100%變化為90%時(shí)，保留時(shí)間從4.9min變化為17.0 min。17.0min時(shí)可將依維菌素與血清中雜質(zhì)基本分離。所以，本法選用甲醇-水(90：10)為流動(dòng)相。

　　2。1。3 柱溫的選擇 柱溫影響待測物質(zhì)與流動(dòng)相、固定相之間的分配、吸附，也影響流動(dòng)相的粘度，進(jìn)

　　而影響保留時(shí)間和峰形。比較了柱溫為20℃、25℃、30℃時(shí)的依維菌素的出峰時(shí)間及峰形，結(jié)果無明顯差別。本法選用柱溫為25℃。

　　2。2 樣品提取條件的優(yōu)化

　　2。2。1 提取溶劑的選擇 從依維菌素的分子式可以看出它是相對分子質(zhì)量大、極性小的化合物，應(yīng)選用極性小的有機(jī)溶劑進(jìn)行提取。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在相同的條件下，乙酸乙酯的提取效率為94.3%;二氯甲烷的提取效率為26.7%。正己烷、乙醚的提取效率為74.0%。故選用乙酸乙酯作為提取劑。2.00ml乙酸乙酯的提取效率小于70%，4.00ml提取效率為94.3%，本法選用4.00ml乙酸乙酯進(jìn)行提取。

　　2。2。2 沉淀劑及其用量的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)，本法選用0.05%偏磷酸-甲醇(7：3，V/V)為血清蛋白沉淀劑，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該沉淀劑沉淀效果好，回收率高。本法選用該沉淀劑用量為1.00ml。

　　2。3 方法考察及性能實(shí)驗(yàn)

　　2。3。1 檢出限和線性范圍 以兩倍信噪比計(jì)算本法樣品的檢出下限為0.010mg/L。本法線性范圍至少為0.010～20mg/L。

　　2。3。2 方法精密度將三種質(zhì)量濃度(0.25mg/L，1.O0mg/L，2.50mg/L)標(biāo)準(zhǔn)溶液于同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣測定6次，得日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)差。

　　2。3。3 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn) 可見，本法回收率范圍為94.0%～100.0%，平均為97.3%。

　　2。4 方法應(yīng)用

　　3 討論

　　常用于評價(jià)收縮和舒張功能的指標(biāo)如射血分?jǐn)?shù)、二尖瓣前向血流E/A及等容舒張時(shí)間，都不同程度地受到心率、心臟前后負(fù)荷及心臟幾何形態(tài)的影響。當(dāng)心室收縮不一致時(shí)，射血分?jǐn)?shù)反映心功能有局限性。心臟功能不全時(shí)心臟收縮和舒張功能異常常合并存在，因此綜合評價(jià)心臟的整體功能更加合理。心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)，即Tei指數(shù)，是一個(gè)重要的綜合收縮功能和舒張功能的多普勒參數(shù)，不受左室?guī)缀涡螒B(tài)及心率的影響。國外系列報(bào)道證明心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)在評價(jià)充血性心力衰竭、擴(kuò)張型心肌病及先心病等患者的心室功能方面有重要的臨床價(jià)值。

　　本研究中無冠脈狹窄組的心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)在0.47士0.05，冠脈狹窄組的心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)高于沒有冠脈狹窄組，與Dagdelen的結(jié)果相似。此外可見心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)有隨狹窄冠脈支數(shù)增加而增加的趨勢，反映左室整體功能隨狹窄冠脈范圍擴(kuò)大而降低。狹窄冠脈的范圍及心肌缺血范圍對預(yù)后有重要影響，本研究中4組病例的射血分?jǐn)?shù)均在正常范圍內(nèi)，沒有差異，可以看出心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)能更敏感地反映左室整體功能的改變，提示心臟功能的早期改變，利于臨床干預(yù)。因此，認(rèn)為心肌運(yùn)動(dòng)指數(shù)能有效地反映不同狹窄范圍冠脈和缺血區(qū)域的左室整體功能變化，能更好地反映心功能，預(yù)示預(yù)后。由于樣本量較小，本研究未能將冠心病患者分為心絞痛組和心肌梗死組，這有待于進(jìn)一步研究。