產(chǎn)品分類
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實(shí)驗(yàn)室儀器
按功能分
- 提供實(shí)驗(yàn)環(huán)境的設(shè)備
- 分離樣品并處理設(shè)備
- 對(duì)樣品前處理的設(shè)備
- 處理實(shí)驗(yàn)器材的設(shè)備
- 保存實(shí)驗(yàn)樣品用設(shè)備
- 1. 冰箱
- 2. 保鮮柜
- 3. 傳感器
- 4. 低壓電氣
- 5. 工業(yè)自動(dòng)化
- 6. 化學(xué)品儲(chǔ)存
- 7. 控濕柜
- 8. 冷藏柜
- 9. 冷凍箱
- 10. 循環(huán)烘箱
- 11. 液氮罐
- 12. 工業(yè)型液氮罐
- 13. 液氮容器配件
- 14. 油桶柜
- 15. 貯存箱
- 1. 搗碎機(jī)
- 2. 超聲波清洗器
- 3. 干燥箱
- 4. 滅菌器\消毒設(shè)備
- 5. 清洗機(jī)
- 1. 蛋類分析儀
- 2. 粉碎機(jī)
- 3. 谷物分析儀
- 4. 混勻儀
- 5. 攪拌器
- 6. 馬弗爐
- 7. 樣品制備設(shè)備
- 8. 破碎、研磨、均質(zhì)儀器
- 9. 消解
- 計(jì)量?jī)x器
- 培養(yǎng)孵育設(shè)備
- 基礎(chǔ)通用設(shè)備
- 通用分析儀器
- 樣品結(jié)果分析
- 1. 計(jì)數(shù)器
- 2. 衡器
- 3. 天平
- 1. CO2培養(yǎng)箱
- 2. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)罐
- 3. 封口用
- 4. 發(fā)芽箱
- 5. 孵育器
- 6. 發(fā)酵罐
- 7. 恒溫槽、低溫槽
- 8. 恒溫恒濕
- 9. 培養(yǎng)箱
- 10. 培養(yǎng)架
- 11. 人工氣候箱
- 12. 水浴、油浴、金屬浴
- 13. 搖床
- 14. 厭氧微需氧細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備
- 1. 邊臺(tái)
- 2. 刨冰機(jī)
- 3. 電熱板
- 4. 輻射檢測(cè)
- 5. 干燥箱
- 6. 瓶口分配器
- 7. 水質(zhì)分析類
- 8. 水質(zhì)采樣器
- 9. 實(shí)驗(yàn)臺(tái)
- 10. 溫、濕、氣壓、風(fēng)速、聲音、粉塵類
- 11. 穩(wěn)壓電源(UPS)
- 12. 文件柜
- 13. 移液器
- 14. 制造水、純水、超純水設(shè)備
- 15. 制冰機(jī)
- 16. 中央臺(tái)
- 17. 真空干燥箱
- 1. 比色計(jì)
- 2. 測(cè)厚儀
- 3. 光度計(jì)
- 4. 光譜儀
- 5. 光化學(xué)反應(yīng)儀
- 6. 電參數(shù)分析儀
- 7. 檢驗(yàn)分析類儀器
- 8. 瀝青檢測(cè)
- 9. 酶標(biāo)儀洗板機(jī)
- 10. 凝膠凈化系統(tǒng)
- 11. 氣質(zhì)聯(lián)用儀
- 12. 氣體發(fā)生裝置
- 13. 水份測(cè)定儀
- 14. 色譜類
- 15. 水質(zhì)分析、電化學(xué)儀
- 16. 石油、化工產(chǎn)品分析儀
- 17. 實(shí)驗(yàn)室管理軟件
- 18. 同位素檢測(cè)
- 19. 透視設(shè)備
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- 10. 均勻度測(cè)定儀
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- 16. 水份測(cè)定儀
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- 電化學(xué)分析類
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- 11. 其他
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- 14. 物化實(shí)驗(yàn)配件
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- 17. 運(yùn)輸罐
按專業(yè)實(shí)驗(yàn)室分- 化學(xué)合成
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抗體保存知多少
[2013/3/18]
通常情況下,抗體經(jīng)恰當(dāng)保存和處理,大多數(shù)應(yīng)能保持活性數(shù)月乃至數(shù)年。當(dāng)然,不同類型抗體,其保存的方法也可能不一樣,以下就抗體的保存,提供一些參考!
一、保存溫度和條件
對(duì)于很多抗體而言,保存在-20℃是完全足夠了,沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)有更多的好處!分裝成小等份可最大程度減少由凍融造成的損傷,以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需凍融一次,如有剩余,可將剩余物保存于 4oC. 在收到抗體時(shí),在 10,000 × g 下離心 20 秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液,并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10 µl; 等份越小,儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
在大多數(shù)情況下,收到抗體時(shí)在 4oC 下保存一至兩周,然后再冷凍進(jìn)行長(zhǎng)期保存是可接受的,但也許腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而應(yīng)該盡快凍存。同樣,遵照說明書上的建議是重要的。
大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時(shí)間,所以是在4℃的條件下來完成的。
對(duì)于特殊的抗體,如酶、熒光素等偶聯(lián)抗體、IgG3同型抗體等抗體的保存有其注意事項(xiàng):
1、偶聯(lián)抗體 酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存,而應(yīng)保存于 4oC. 凍融不僅影響抗體結(jié)合能力,還會(huì)降低酶活性。無論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是生物素,偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹. 暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響,在實(shí)驗(yàn)的所有階段都應(yīng)避光。
2、IgG3的同型對(duì)照 保存在4℃,避免凍起來。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體
二、用疊氮化鈉防止污染
為了防止微生物污染,可將疊氮化鈉加入抗體制備品中達(dá)到0.02% (w/v). 的終濃度。但是有時(shí)不能使用疊氮化鈉,有以下兩中情形:
(1)、如果用抗體染色或處理活細(xì)胞,或如果用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究,一定要使用不包含疊氮化鈉的制備品。該抗菌劑也對(duì)大多數(shù)其它生物具有毒性:它阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
(2)、疊氮化鈉會(huì)干擾氨基參與的任何偶聯(lián),應(yīng)在偶聯(lián)進(jìn)行前除去。偶聯(lián)后,
抗體可保存于疊氮化鈉中,除此以外,0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。
疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾從抗體溶液中除去。IgG 的分子量為 150,000 道爾頓(IgM 為約 600,000);疊氮化鈉的分子量為 65 道爾頓。截留分子量為 14,000 道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時(shí)使疊氮化物向外擴(kuò)散。在保持于 4oC 的磁性攪拌器上的燒杯中,每毫升抗體使用至少一升冷 PBS 并攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無菌操作。
三、冷凍/融化損傷
重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性,導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。保存于 -20oC 對(duì)于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)?保存于 -80oC 無明顯優(yōu)勢(shì)。冰箱不能為無霜型。 這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜)恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因,抗體試劑瓶應(yīng)置于具有最小溫度波動(dòng)的冰箱區(qū)域,例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
有些研究人員加入冷凍保護(hù)劑甘油達(dá)到 50% 的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點(diǎn)降低至低于 -20oC。雖然這對(duì)于很多抗體是可接受的,但還是不能確保在該保存條件下的穩(wěn)定性,通常我們參考具體產(chǎn)品說明書提供的保存方法。在這里,我們也一般不建議將包含甘油的溶液保存于 -80oC,因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷哪厅c(diǎn)。還要注意甘油可被細(xì)菌污染。如果加入甘油或任何冷凍保護(hù)劑,則應(yīng)當(dāng)小心操作,以得到無菌制備物。
應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在 4℃ 下保存超過一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時(shí)一般不易降解,理想的濃度為 1 mg/ml 或更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如 BSA 作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ)。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失。對(duì)于打算進(jìn)行偶聯(lián)的抗體而言,由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會(huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng),降低了偶聯(lián)的效率,所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)。
一、保存溫度和條件
對(duì)于很多抗體而言,保存在-20℃是完全足夠了,沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)有更多的好處!分裝成小等份可最大程度減少由凍融造成的損傷,以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需凍融一次,如有剩余,可將剩余物保存于 4oC. 在收到抗體時(shí),在 10,000 × g 下離心 20 秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液,并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10 µl; 等份越小,儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
在大多數(shù)情況下,收到抗體時(shí)在 4oC 下保存一至兩周,然后再冷凍進(jìn)行長(zhǎng)期保存是可接受的,但也許腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而應(yīng)該盡快凍存。同樣,遵照說明書上的建議是重要的。
大部分抗體的運(yùn)輸條件:一般的運(yùn)輸過程需要1-2周的時(shí)間,所以是在4℃的條件下來完成的。
對(duì)于特殊的抗體,如酶、熒光素等偶聯(lián)抗體、IgG3同型抗體等抗體的保存有其注意事項(xiàng):
1、偶聯(lián)抗體 酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存,而應(yīng)保存于 4oC. 凍融不僅影響抗體結(jié)合能力,還會(huì)降低酶活性。無論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是生物素,偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹. 暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響,在實(shí)驗(yàn)的所有階段都應(yīng)避光。
2、IgG3的同型對(duì)照 保存在4℃,避免凍起來。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體
二、用疊氮化鈉防止污染
為了防止微生物污染,可將疊氮化鈉加入抗體制備品中達(dá)到0.02% (w/v). 的終濃度。但是有時(shí)不能使用疊氮化鈉,有以下兩中情形:
(1)、如果用抗體染色或處理活細(xì)胞,或如果用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究,一定要使用不包含疊氮化鈉的制備品。該抗菌劑也對(duì)大多數(shù)其它生物具有毒性:它阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
(2)、疊氮化鈉會(huì)干擾氨基參與的任何偶聯(lián),應(yīng)在偶聯(lián)進(jìn)行前除去。偶聯(lián)后,
抗體可保存于疊氮化鈉中,除此以外,0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。
疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾從抗體溶液中除去。IgG 的分子量為 150,000 道爾頓(IgM 為約 600,000);疊氮化鈉的分子量為 65 道爾頓。截留分子量為 14,000 道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時(shí)使疊氮化物向外擴(kuò)散。在保持于 4oC 的磁性攪拌器上的燒杯中,每毫升抗體使用至少一升冷 PBS 并攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無菌操作。
三、冷凍/融化損傷
重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性,導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。保存于 -20oC 對(duì)于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)?保存于 -80oC 無明顯優(yōu)勢(shì)。冰箱不能為無霜型。 這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜)恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因,抗體試劑瓶應(yīng)置于具有最小溫度波動(dòng)的冰箱區(qū)域,例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
有些研究人員加入冷凍保護(hù)劑甘油達(dá)到 50% 的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點(diǎn)降低至低于 -20oC。雖然這對(duì)于很多抗體是可接受的,但還是不能確保在該保存條件下的穩(wěn)定性,通常我們參考具體產(chǎn)品說明書提供的保存方法。在這里,我們也一般不建議將包含甘油的溶液保存于 -80oC,因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷哪厅c(diǎn)。還要注意甘油可被細(xì)菌污染。如果加入甘油或任何冷凍保護(hù)劑,則應(yīng)當(dāng)小心操作,以得到無菌制備物。
應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在 4℃ 下保存超過一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時(shí)一般不易降解,理想的濃度為 1 mg/ml 或更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如 BSA 作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ)。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失。對(duì)于打算進(jìn)行偶聯(lián)的抗體而言,由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會(huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng),降低了偶聯(lián)的效率,所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)。
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