放射免疫測定方法，用放射免疫分析進行測定時分三個步驟，即抗原抗體的競爭抑制反應、B和F的分離及放射性的測量。

　　(一)抗原抗體反應

　　將抗原(標準品和受檢標本)、標記抗原和抗血清按順序定量加入小試管中，在一定的溫度下進行反應一定時間，使競爭抑制反應達到平衡。不同質量的抗體和不同含量的抗原對溫育的溫度和時間有不同的要求。如受檢標本抗原含量較高，抗血清的親和常數(shù)較大，可選擇較高的溫度(15～37℃)進行較短時間的溫育，反之應在低溫(4℃)作較長時間的溫育，形成的抗原抗體復合物較為牢固。

　　(二)B、F分離技術

　　在RIA反應中，標記抗原和特異性抗體的含量極微，形成的標記抗原抗體復合物(B)不能自行沉淀，因此需用一種合適的沉淀劑使它徹底沉淀，以完成與游離標記抗原(F)的分離。另外對小分子量的抗原也可采取吸附法使B與F分離。

　　1.第二抗體沉淀法這是RIA中最常用的一種沉淀方法。將產生特異性抗體(第一抗體)的動物(例如兔)的IgG免疫另一種動物(例如羊)，制得羊抗兔IgG血清(第二抗體)。由于在本反應系統(tǒng)中采用第一、第二兩種抗體，故稱為雙抗體法。在抗原與特異性抗體反應后加入第二抗體，形成由抗原-第一抗體-第二抗體組成的雙抗體復合物。但因第一抗體濃度甚低，其復合物亦極少，無法進行離心分離，為此在分離時加入一定量的與一抗同種動物的血清或IgG，使之與第二抗體形成可見的沉淀物，與上述抗原的雙抗體復合物形成共沉淀。經離心即可使含有結合態(tài)抗原(B)的沉淀物沉淀，與上清液中的游離標記抗原(F)分離。

　　將第二抗體結合在顆粒狀的固相載體之上即成為固相第二抗體。利用固相第二抗體分離B、F，操作簡便、快速。

　　2.聚乙二醇(PEG)沉淀法最近各種RIA反應系統(tǒng)逐漸采用了PEG溶液代替第二抗體作沉淀劑。PEG沉淀劑的主要優(yōu)點是制備方便，沉淀完全。缺點是非常特異性結合率比用第二抗體為高，且溫度高于30℃時沉淀物容易復溶。

　　3.PR試劑法是一種將雙抗體與PEG二法相結合的方法。此法保持了兩者的優(yōu)點，節(jié)省了兩者的用量，而且分離快速、簡便。

　　4.放射免疫測定方法，活性炭吸附法小分子游離抗原或半抗原被活性炭吸附，大分子復合物留在溶液中。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖，使它表面具有一定孔徑的網眼，效果更好。在抗原與特異性抗體反應后，加入葡聚糖-活性炭。放置5～10min，使游離抗原吸附在活性炭顆粒上，離心使顆粒沉淀，上清液中含有結合的標記抗原。此法適用于測定類固醇激素，強心糖苷和各種藥物，因為它們是相對非極性的，又比抗原抗體復合物小，易被活性炭吸附。