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氨基酸分離純化的辦法

[2013/7/30]

  氨基酸鹽析常用的中式鹽,主要有-硫-酸-銨、-硫-酸-鎂、-硫-酸-鈉、食鹽、磷酸鈉等。因?yàn)檫@個(gè)在鹽析前血清要加等量機(jī)體機(jī)能鹽水稀釋,使氨基酸含量在2.5-3.0百分之百。這個(gè)之外也可用葡糖凝膠G-25或G-50過柱的方法除鹽,所用的時(shí)間就比較短。氨基酸液體濃度:氨基酸液體濃度高時(shí),欲離合的氨基酸每常摻雜著其它氨基酸地一塊兒沉淀出來(共沉現(xiàn)象)。鹽析時(shí)若溶液pH在氨基酸等電點(diǎn)則效果更好。普通溫度低氨基酸溶介度減低。

  影響鹽析的因素有:溫度:除對(duì)溫度敏銳的氨基酸在低溫5度操作外這時(shí)需要使用生化培養(yǎng)箱,普通可在室溫中施行。pH值:大部分?jǐn)?shù)氨基酸在等電點(diǎn)時(shí)在濃鹽溶液中的溶介度最低。

  氨基酸在用鹽析沉淀離合后,需將氨基酸中的鹽去掉除掉,常用的方法是透析,即把氨基酸溶液裝入秀析袋內(nèi)常用的是玻璃紙,施行透析,并不斷的改變,因透析所需時(shí)間較長(zhǎng),所以最好在低溫中施行。因?yàn)楦鞣N氨基酸分子顆粒體積、親水程度不一樣,故鹽析所需的鹽液體濃度也不同,因?yàn)檫@個(gè)調(diào)節(jié)混合氨基酸溶液中的中式鹽液體濃度可使各種氨基酸分段沉淀。但有的氨基酸如鮮紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白在較高的溫度20度比0度時(shí)溶解度低,培養(yǎng)箱更容易鹽析。

  中式鹽對(duì)氨基酸的溶解度有顯著影響,普通在低鹽液體濃度下隨著鹽液體濃度升高,氨基酸的溶解度增加,此稱鹽溶;當(dāng)鹽液體濃度接著升高時(shí),氨基酸的溶解度不一樣程度減退并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析,將數(shù)量多的鹽加到氨基酸溶液中,高液體濃度的鹽離子如-硫-酸-銨的SO4和NH4有很強(qiáng)的水合力,可奪氨基酸分子的水合層使之失水,于是氨基酸膠粒凝固并沉淀析出。那里面應(yīng)用最多的-硫-酸-銨,它的長(zhǎng)處是溫度系數(shù)小而溶解度大20度時(shí)達(dá)到最高限度溶液為4.1M,即767克/升;0度時(shí)達(dá)到最高限度溶解度為3.9M,即676克/升),在這一溶解度范圍內(nèi),很多氨基酸和酶都可以鹽析出來;額外-硫-酸---銨分段鹽析效果也比其它鹽好,不易引動(dòng)氨基酸改變性別。-硫-酸-銨溶液的pH常在4.5-5.5之間,當(dāng)用其它pH值施行鹽析時(shí),需用-硫-酸-或氨水調(diào)節(jié)。