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細(xì)胞破碎的技術(shù)方法

[2013/9/9]

  細(xì)胞破碎技術(shù)是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁,使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來(lái)的技術(shù),是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)(產(chǎn)品)的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展,以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。

  由于細(xì)菌、酵母、真菌、植物都有細(xì)胞壁,但成分不同,且同類(lèi)細(xì)胞結(jié)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不同,因此其細(xì)胞壁的堅(jiān)固程度不同,總體呈現(xiàn)遞增態(tài)勢(shì)。動(dòng)物細(xì)胞雖沒(méi)有細(xì)胞壁,但具有細(xì)胞膜,也需要一定的細(xì)胞破碎方法來(lái)破膜,達(dá)到提取產(chǎn)物的目的。

  化學(xué)試劑法

  • 方法:某些有機(jī)溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)含物有選擇地滲透出來(lái)。SDS(十二烷基磺酸鈉)是典型的陰離子表面活性劑

  • 特點(diǎn):提取核酸時(shí),常用此法破碎細(xì)胞。

  • 存在的問(wèn)題:

  a) 時(shí)間長(zhǎng),效率低;

  b) 化學(xué)試劑毒性較強(qiáng),同時(shí)對(duì)產(chǎn)物也有毒害作用