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DNA雙鏈斷裂方法的優(yōu)勢

[2013/9/14]

  (1)能夠按照人們的意愿精確修飾/改造基因組;

  (2)實(shí)現(xiàn)基因敲入(knock-in)和條件性基因敲除(conditional gene knock-out);

  (3)精確制備模擬人類遺傳病的動(dòng)物模型:很多人類的遺傳病是致病基因的錯(cuò)義突(missense)造成的,用同源重組的方法可以在斑馬魚中造成相對應(yīng)的基因突變形式,從而 在基因水平精確模擬人類疾病。

  此外,跟短片段單鏈寡聚核苷酸造成的重組修復(fù)(Steven Ekker的方法,只能進(jìn)行小范圍修飾)相比,用傳統(tǒng)的長雙鏈DNA做同源重組打靶載體至少有以下優(yōu)點(diǎn):

  (1) 能夠進(jìn)行大片段的基因修飾,比如將報(bào)告基因(如GFP)整合到內(nèi)源基因中,或模擬基因較大片段缺失引發(fā)的人類遺傳病(這種病也有很多)等等;

  (2)容易檢測隨機(jī)插入(利用接頭介導(dǎo)的PCR或Southern雜交技術(shù)),這對于條件性基因敲除尤其重要。因?yàn)閘oxP或FRT這樣的短序列插入非特異的位點(diǎn),有可能引發(fā)意想不到的后果,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以解釋;

  (3)由于可以進(jìn)行大片段修飾,使人們有可能一次性插入兩個(gè)loxP位點(diǎn),完成條件性基因敲除;短片段單鏈寡聚核苷酸的方法要分成兩步進(jìn)行,需要兩次篩選,加上養(yǎng)殖時(shí)間,會(huì)耗費(fèi)更多的精力、時(shí)間和空間。