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常見(jiàn)小鼠采血方法

[2013/10/31]

  一、小鼠灌胃

  小鼠灌胃方法比較簡(jiǎn)單,需要關(guān)注的只有兩點(diǎn):

  1)要保持小鼠的頭部和頸部成一直線,方便灌胃針頭進(jìn)入;

  2)動(dòng)作要輕柔,從口角進(jìn)入,防止損失食道。做的多了自然就熟練了。

  具體操作過(guò)程如下:

  1. 準(zhǔn)備灌胃針頭。一般可以從市場(chǎng)上面買到,實(shí)在沒(méi)有的話,可以用12號(hào)的針頭,剪去針尖,用砂紙將頭端磨平,也可以用。但是買的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口,自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉,用這樣的針頭灌胃,損失小鼠食道的可能性比較大。

  2.抓住小鼠,使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動(dòng)作很簡(jiǎn)單,左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴,另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部即可。因?yàn)樾∈笫冀K在活動(dòng)中,若一次抓的感覺(jué)不是很順手,要放開(kāi)重新抓,不要逞強(qiáng)進(jìn)行下一步操作。

  3. 抓好小鼠就可以灌胃了,一般用1ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進(jìn)入,壓住舌頭,抵住上顎,輕輕向內(nèi)推進(jìn),進(jìn)入食管后會(huì)有一個(gè)刺空感,進(jìn)入食道后就可以推注藥液了。(我認(rèn)為,所謂的灌胃,不必要灌胃針頭進(jìn)入小鼠的胃部,進(jìn)入食管后就可以推藥了,這樣對(duì)小鼠食道的損傷要小點(diǎn),特別是要長(zhǎng)期灌胃給藥的情況下。)當(dāng)然,灌胃針頭也可以再往里面深入一點(diǎn),防止藥液從口中流出。

  4. 灌胃容積一般是0.1~0.2ml/10g,最大0.35ml/10g,每只小鼠的灌胃最大容積不超過(guò)0.8ml。

  二、小鼠腹腔注射

  腹腔注射是常見(jiàn)的給藥方式,尤其是在麻醉時(shí)。常見(jiàn)的麻醉方法均是麻醉yao物腹腔注射。

  1. 小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器,配合4號(hào)針頭。

  2. 腹腔注射時(shí)右手持注射器,左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴,另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部,使小鼠的頭部向下。這樣腹腔中的器官就會(huì)自然倒向胸部,防止注射器刺入時(shí)損傷大腸、小腸等器官。進(jìn)針的動(dòng)作要輕柔,防止刺傷腹部器官。

  3. 尤其是對(duì)于體重較小的小鼠,腹腔注射時(shí)針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離,最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針,穿過(guò)腹中線后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔,注射完藥物后,緩緩拔出針頭,并輕微旋轉(zhuǎn)針頭,防止漏液。

  4. 小鼠腹腔注射的給藥容積一般為5~10ml/kg。

  三、小鼠靜脈注射

  這也是常見(jiàn)的操作,稍微有點(diǎn)難度,沒(méi)有指導(dǎo)的話,一開(kāi)始可能會(huì)感覺(jué)有點(diǎn)手足無(wú)措。但是可以肯定的說(shuō),只要掌握了方法,小鼠的尾靜脈注射還是很容易的。

  操作步驟:

  1. 首先要固定小鼠,最簡(jiǎn)單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面,讓它的尾巴伸在盒蓋的外面,用手抓住小鼠尾巴,輕輕往外拽,就可以固定好小鼠了。這種固定方法,小鼠可以在盒子里面活動(dòng),固定的也不是很牢固,但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練,就足以用來(lái)注射了。

  還有的固定方法就是用一個(gè)小的圓筒,最好是金屬做的,(可以在當(dāng)?shù)氐蔫F匠鋪,或者買白鐵鋪里面定做)首先是金屬比較結(jié)實(shí),而且可以用來(lái)固定在鐵架臺(tái)上,方便操作。圓筒的一段有個(gè)蓋子可以拿下來(lái),蓋子中間有個(gè)小孔,可以讓小鼠的尾巴伸出來(lái)(中間的小孔可以用膠布纏一下,防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴)。另外一段可以用金屬網(wǎng)的結(jié)構(gòu),網(wǎng)的形狀可以做成子彈頭的頭端形狀。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以讓光線透近來(lái),方便小鼠鉆進(jìn)圓筒里面。圓筒的長(zhǎng)度約10cm,直徑約 3~4cm,可以做個(gè)系列長(zhǎng)度和直徑的圓筒,適合不同大小的小鼠。

  2. 固定好小鼠后就是注射了,一般用一次性的1ml的注射器就可以了,玻璃 的1ml的注射器也可以用,針頭用4號(hào)的就可以了。

  3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈。可以采用75%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管很不清楚,推薦采用溫水浸泡的方法,水溫以不燙手為宜。溫水浸泡2~3分鐘后,取出小鼠尾巴,用干棉球擦拭。等一會(huì)兒,待血管充盈后,酒精棉球擦拭后就可以進(jìn)針了。若血管還不充盈,可以反復(fù)用溫水浸泡,切不可冒險(xiǎn)注射,除非你手法很熟練,另當(dāng)別論。

  4. 小鼠尾部共有四條血管,一般認(rèn)為左右的兩條靜脈比較容易注射,多采用這兩條靜脈進(jìn)針。一般要求進(jìn)針部位靠近小鼠的尾端,這樣若注射失敗的話,還可以再向上選擇進(jìn)針點(diǎn)。但是進(jìn)針部位也不可以太靠下,因?yàn)樵酵,靜脈越細(xì),操作越難,一般以小鼠尾巴下三分之一的位置比較好。

  5. 最關(guān)鍵的就是進(jìn)針了。進(jìn)針時(shí)操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴,讓小鼠的尾巴在經(jīng)過(guò)拇指后向下彎曲,進(jìn)針點(diǎn)靠近拇指指甲。針頭和血管呈約30°角,針尖斜面朝上,輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行,一般情況下一次就可以進(jìn)入血管,可以將針頭刺入血管一大半,左右輕輕晃動(dòng)針頭,確定針頭在血管內(nèi),就可以推注藥液了,正常情況下,推注的過(guò)程應(yīng)該沒(méi)有明顯阻力,血管也不會(huì)鼓起。推液時(shí)動(dòng)作宜輕柔,若發(fā)現(xiàn)血管鼓起,那是針頭沒(méi)有刺入血管,需立即拔出針頭。

  四、下注射給藥

  將藥液推入皮下結(jié)締組織,經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的過(guò)程。作皮下注射常選項(xiàng)背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時(shí),常規(guī)消毒注射部位皮膚,然后將皮膚提起,注射針頭取一鈍角角度刺入皮下,把針頭輕輕向左右擺動(dòng),易擺動(dòng)則表示已刺入皮下,再輕輕抽吸,如無(wú)回血,可緩慢地將藥物注入皮下。拔針時(shí)左手拇、食指捏住進(jìn)針部位片刻,以防止藥物外漏。注射量約為0.1~0.3ml/10g體重。

  五、皮內(nèi)注射給藥

  將藥液注入皮膚的表皮河真皮之間,觀察皮膚血管的通透性變化或皮內(nèi)反應(yīng),接種、過(guò)敏實(shí)驗(yàn)等一般作皮內(nèi)注射。先將注射部位的被毛剪掉,局部常規(guī)消毒,左手拇指和食指按住皮膚使之繃緊,在兩指之間,用結(jié)核菌素注射器連接4.5針頭穿刺,針頭進(jìn)入皮膚淺層,再向上挑起并梢刺入,將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)一白色小皮丘,而皮膚上的毛孔極為明顯。注射量為0.1ml/次。

  六、肌肉注射給藥

  小鼠體積小,肌肉少,很少采用肌肉注射。當(dāng)給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí),采用肌肉注射。操作時(shí)1人固定小鼠,另一人用左手抓住小鼠的1條后肢,右手拿注射器。將注射器與半腱肌呈90°角迅速插入1/4,注入藥液,用藥量不超0.1ml/10g體重。

  七、靜脈注射給藥

  將小鼠放在金屬籠或鼠夾中,通過(guò)金屬籠或鼠夾的孔拉出尾巴,用左手抓住小鼠尾巴中部。小鼠的尾部有2條動(dòng)脈和3條靜脈,2條動(dòng)脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面,3條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩惻的靜脈.拔去沿尾部靜脈走向的毛,置尾巴于45~50℃溫水中浸泡幾分鐘或用75%酒精棉球反復(fù)擦拭尾部,以達(dá)到消毒和使尾部血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。行尾部靜脈注射時(shí),以左手拇指和食指捏住鼠尾兩惻,使靜脈更為充盈,用中指從下面托起尾巴,以無(wú)名指夾住尾巴的末梢,右手持4號(hào)針頭注射器,使針頭與靜脈平行(小于30°角),從尾巴的下1/4處進(jìn)針,開(kāi)始注入藥物時(shí)應(yīng)緩慢,仔細(xì)觀察,如果無(wú)阻力,無(wú)白色皮丘出現(xiàn),說(shuō)明已刺入血管,可正式注入藥物。有的實(shí)驗(yàn)需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥,注射部位應(yīng)盡可能從尾端開(kāi)始,按次序向尾根部移動(dòng),更換血管位置注射給藥。注射量為0.05~0.1ml/10g體重。拔出針頭后,用拇指按住注射部位輕壓1~2min,防止出血。

  八、小鼠采血

  1.剪尾采血

  手拇指和食指從背部抓住小鼠頸部皮膚,將小鼠頭朝下,小鼠保定后將其尾巴置于50°熱水中浸泡數(shù)分鐘,使尾部血管充盈。擦干尾部,再用剪刀或刀片剪去尾尖1~2mm,用試管接流出的血液,同時(shí)自尾根部向尾尖按摩。取血后用棉球壓迫止血并用6%液體火棉膠涂在傷口處止血。每次采血量0.1ml。

  2.摘除眼球采血

  左手抓住小鼠頸部皮膚,輕壓在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,取側(cè)臥位,左手食指盡量將小鼠眼周皮膚往頸后壓,使眼球突出。用眼科彎鑷迅速夾去眼球,將鼠倒立,用器皿接住流出的血液。采血完畢立即用紗布?jí)浩戎寡C看尾裳?.6~0.1ml。

  3.心臟采血

  小鼠仰臥位固定,剪去胸前區(qū)被毛,皮膚消毒后,用左手食指在左側(cè)第3~4肋間觸摸到心搏處,右手持帶有4~5號(hào)針頭的注射器,選擇心搏最強(qiáng)處穿刺,當(dāng)刺中心臟時(shí),血液會(huì)自動(dòng)進(jìn)入注射器。每次采血量0.5~0.6ml。

  4.斷頭采血

  動(dòng)物醫(yī)學(xué)論壇右手用剪刀剪斷小鼠頸部約1/2~4/5,讓血液流入試管。此法可采血0.8~1.2ml。