一、徒手制片

　　1. 徒手制片及特點(diǎn)

　　徒手制片(切片)一般指徒手用刀片(常用單面刀片)把新鮮的植物材料切成薄片的制片方法。此法在植物制片中具有十分重要的地位，是一種普遍應(yīng)用的制片方法。

　　徒手制片的主要優(yōu)點(diǎn)是：能及時(shí)觀察研究植物生活組織的結(jié)構(gòu)和天然色彩;方法及用具簡(jiǎn)單，不需切片機(jī)等機(jī)械設(shè)備，短時(shí)間即可完成，這是其他方法所不及的;

　　徒手制片的主要缺點(diǎn)是：對(duì)于微小、柔軟、水分過(guò)多以及堅(jiān)硬的材料，難以用徒手切成薄片;對(duì)于操作不熟練者，往往切成厚薄不勻或不完整的切片。

　　2. 徒手制片的方法及注意事項(xiàng)

　　徒手制片最主要的工具就是刀片，�？捎脝蚊姹０驳镀�。要獲得良好的切片，首先要保持刀口的鋒利，切片前，先準(zhǔn)備好一個(gè)培養(yǎng)皿盛好清水，同時(shí)準(zhǔn)備好顯微鏡、載玻片、蓋玻片、刀片等用具，然后拿取材料進(jìn)行切片。材料可以是新鮮的材料，也可以是經(jīng)過(guò)固定的材料。

　　切片時(shí)，將欲切材料斷面和刀片上滴上清水以保持材料濕潤(rùn)。以左手拇指、食指、中指捏住材料，拇指應(yīng)低于食指，以免切傷手指;材料高出指尖。右手執(zhí)刀，將刀平放在食指上，刀口朝內(nèi)，刀面與材料斷面平行，然后以均勻快捷的動(dòng)作自左前方向右后方以臂力帶動(dòng)刀片水平切割移動(dòng)，不要用腕力。切片時(shí)還要注意，切時(shí)動(dòng)作要迅速，材料一次切下，切忌停頓或拉鋸式切割。連續(xù)切數(shù)片后，將切下的薄片輕輕移入盛水的培養(yǎng)皿中備用。然后挑選薄而透明的切片，放在載玻片上的水滴中，加上蓋玻片制成臨時(shí)制片進(jìn)行觀察。

　　用徒手切片的材料不宜過(guò)大，一般以表面不超過(guò)5-8mm²為宜。對(duì)于過(guò)于柔軟或微小的材料(如葉片、細(xì)小的根尖等)需要借助一些夾持物方可進(jìn)行切片，如果臨時(shí)制片需保存一段時(shí)間，(1)將材料封在水中，每隔20-30分鐘再加一滴水，此法可保持?jǐn)?shù)小時(shí);(2)用10%-30%的甘油水溶液代替清水封片，并將制片放在鋪有濕濾紙的大培養(yǎng)皿中保存，或用石蠟或指甲油封邊保存，可保存1-2周或更長(zhǎng)時(shí)間。

　　二、壓片及涂片

　　涂片和壓片是進(jìn)行植物染色體觀察研究常用的制片方法。其中涂片是將新鮮的材料或者是經(jīng)過(guò)固定的材料于載片上，托涂成均勻一層，經(jīng)染色后蓋上蓋玻片鏡檢。壓片是將處理后的材料于載片上分散后加蓋片，用拇指或鑷子輕輕擠壓蓋片，使組織分散成一片，然后鏡檢。

　　用此法進(jìn)行染色體觀察時(shí)注意，若進(jìn)行染色體數(shù)目測(cè)定要求取樣個(gè)體數(shù)在5個(gè)以上，細(xì)胞總數(shù)在30個(gè)以上;若進(jìn)行染色體核型分析(組型分析)則要求取樣應(yīng)是來(lái)源于不同個(gè)體的5個(gè)細(xì)胞。

　　1.取材：與細(xì)胞分裂旺盛時(shí)期取樣，一般植物在上午9-12時(shí)，下午2-5時(shí)，一般取根尖、莖尖。

　　2.預(yù)處理(前處理)：目的是防止紡錘體的形成，使細(xì)胞分裂停止在中期階段，從而獲得較多的中期分裂相，同時(shí)預(yù)處理還可以使染色體收縮變短，便于觀察統(tǒng)計(jì)。常用的預(yù)處理藥劑有：0.05%-0.2%的秋水仙堿溶液、8-羥基喹啉0.002-0.004M、對(duì)二氯苯飽和水溶液、富民隆0.01-0.001%。預(yù)處理的時(shí)間一般為2-12小時(shí)。

　　3. 固定：目的是把細(xì)胞迅速殺死，是蛋白質(zhì)變性沉淀，盡量保持材料結(jié)構(gòu)的原有狀態(tài)。常用的固定液為卡諾固定液，即3：1的純酒精:冰醋酸溶液。固定時(shí)間一般為1-24小時(shí)。

　　4.解離：用鹽酸處理固定后的材料，使細(xì)胞分離，便于壓片。一般可用1N的HCl于60攝氏度下15-20分鐘或5N的HCl室溫下20-25分鐘。

　　5.染色：用卡寶-品紅或醋酸洋紅等核染色劑進(jìn)行染色。

　　6.壓片：將材料移至載玻片上，蓋上蓋玻片，然后輕輕擠壓蓋片，使材料成一薄層。

　　7.鏡檢：將制好的片子于顯微鏡下進(jìn)行染色體觀察。

　　8.封片：臨時(shí)封片可用石蠟封邊即可。好的片子可進(jìn)行冷凍干燥，然后用光學(xué)樹(shù)膠封固保存。