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提高轉(zhuǎn)染實驗效率的注意事項

[2014/1/7]

  關(guān)于轉(zhuǎn)染體系的關(guān)鍵組分對細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗的效率有何影響,給予您一些關(guān)于如何使它們更有利于您研究方面的提示,DNA轉(zhuǎn)染如何提高轉(zhuǎn)染實驗成功率。

  成功轉(zhuǎn)染第一步,細(xì)胞培養(yǎng)注意事項。有時需要根據(jù)細(xì)胞系來選擇合適的轉(zhuǎn)染方法;而有時一些啟動子在不同的細(xì)胞系中表現(xiàn)的功能也不同。這些都是設(shè)計實驗時需要考慮的因素,姑且不論。不過因為受限于特定的細(xì)胞,如何選擇合適的轉(zhuǎn)染方法就值得考究了。

  成功轉(zhuǎn)染第二步,質(zhì)粒的因素。啟動子的選擇對于轉(zhuǎn)染基因的有效表達是非常重要的。對于轉(zhuǎn)染過程本身雖然無甚影響,但是對轉(zhuǎn)染結(jié)果卻有著微妙的影響。

  RNA\siRNA\Oligo轉(zhuǎn)染注意事項:轉(zhuǎn)染時的細(xì)胞匯合度常常會比DNA轉(zhuǎn)染高一點,也許是因為RNA轉(zhuǎn)染表達比DNA快?RNA轉(zhuǎn)染的用量必須參考轉(zhuǎn)染試劑說明,因為RNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例決定了轉(zhuǎn)染復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和凈電荷,以及是否容易被細(xì)胞膜吸附和內(nèi)吞。RNA少了固然表達不好,太多也會有毒性的問題。