抗體的選擇和保存指南:

　　當(dāng)我們要檢測(cè)目的蛋白在組織中表達(dá)情況的時(shí)候，如何選擇適合我們實(shí)驗(yàn)需要的抗體，并恰當(dāng)保存使用，是每個(gè)科研人員需要細(xì)心考慮的�？贵w種類繁多，品牌眾多，技術(shù)參數(shù)不一，價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買到高質(zhì)量價(jià)格合適的抗體，并準(zhǔn)確地做出我們想要的結(jié)果，其中有很多細(xì)節(jié)需要注意。

　　一、怎樣選擇適合你實(shí)驗(yàn)需要的抗體

　　1. 一抗選擇要點(diǎn)

　　(1)確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。

　　(2)確定你的實(shí)驗(yàn)類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說明書列出的已驗(yàn)證的類型來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。

　　(3)確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種物種實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)說明書列出已驗(yàn)證的種屬來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。

　　(4)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會(huì)變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。

　　(5)單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。

　　2. 二抗選擇要點(diǎn)

　　(1)種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

　　(2)標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。

　　二、抗體的穩(wěn)定性

　　1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進(jìn)化的結(jié)果�？贵w是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

　　2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時(shí)間溫度達(dá)到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。

　　3. 抗體的純度。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù)，確�？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

　　4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。

　　三、怎樣確定抗體購買渠道和品牌

　　國外著名抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價(jià)格較貴，而且很多抗體品牌本身不生產(chǎn)抗體，隨著網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的越來越普及，我們自己就可以通過國內(nèi)外的相關(guān)網(wǎng)站來檢索，國外最大的生物試劑查詢網(wǎng)站：biocompare，國內(nèi)最大的生物試劑查詢網(wǎng)站：丁香通，來查找我們所需要的產(chǎn)品資料。

　　四、怎樣保存已獲得的抗體

　　抗體無論是保存還是運(yùn)輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融，收到抗體后請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，對(duì)抗體進(jìn)行分裝，避免同一管抗體反復(fù)凍融(反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力)�？贵w保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當(dāng)，抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。請(qǐng)謹(jǐn)記，無論何時(shí)請(qǐng)按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。

　　1. 收到抗體后，請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，(無論是液體還是凍干粉狀態(tài))，再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul，請(qǐng)延長離心時(shí)間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來)�？贵w一般使用特制的儲(chǔ)存管，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來(即使是在10000rpm離心也會(huì)離心不完全，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象)。

　　2.

　　(1)對(duì)絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就完全足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)更好。

　　(2)分裝可以最大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。

　　(3)分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，最少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

　　(4)復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來。

　　(5)抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，4℃保存盡量不要超過1天。

　　(6)絕對(duì)避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復(fù)凍融。

　　3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對(duì)抗體活性沒有影響。

　　4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過程需要1~2周的時(shí)間，所以是在低溫4℃的條件下來完成的。

　　4℃運(yùn)輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害(如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過程)，所以運(yùn)輸過程中絕對(duì)避免干冰運(yùn)輸。

　　關(guān)于疊氮化鈉(sodium azide)的使用：

　　為了防止微生物污染，疊氮化鈉經(jīng)常被加入到抗體中(終濃度0.02% (w/v))。

　　注：疊氮化鈉的去除方式

　　可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量是150kDa(IgM約600kDa);疊氮化鈉的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。