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微量免疫電泳實驗

[2015/9/10]

  實驗方法原理免疫電泳法(immunoelectrophoresis)是把蛋白質(zhì)電泳分離技術(shù)(瓊脂電泳)和免疫學(xué)檢測技術(shù)(雙向擴散)結(jié)合起來的檢測法。此法在微量的基礎(chǔ)上具有分辨率高,靈敏度高,時間短等優(yōu)點,是很理想的分離和鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測定。在臨床診斷方面也有應(yīng)用價值。

  實驗材料IgG 兔抗人IgG

  試劑、試劑盒瓊脂巴比妥鈉,牛血清白蛋白

  儀器、耗材電泳儀,水平電泳槽,打孔器,微量加樣器牙簽,載玻片,恒溫水浴小刀

  實驗步驟    

  1.瓊脂板的鋪制鋪好瓊脂板,打孔劃槽,電泳時不要把槽中的瓊脂挑出來(槽的兩縱向平行邊先不劃開)。

  2.加樣使瓊脂板的上孔里充滿抗原溶液,下孔里充滿著指示蛋白。

  3.電泳同上操作方法,調(diào)電流強度為24mA/cm。當(dāng)指示蛋白質(zhì)到達濾紙的邊緣時就可以停止電泳。一般需要4060min。

  4. 擴散電泳結(jié)束后,從瓊脂板中間的槽里用牙簽挑出瓊脂凝膠,并加入免疫血清。將瓊脂板置溫盒內(nèi)(或培養(yǎng)皿中),蓋好蓋子放置一夜。次日可以觀察到凝膠內(nèi)出現(xiàn)的沉淀線。一般情況下每一沉淀線即代表一種抗原成分。根據(jù)沉淀的數(shù)量、位置可以判斷抗原的純度以及抗原蛋白質(zhì)的種類。微量免疫電泳常用于分析樣品的血清成分。

  5. 觀察免疫電泳的圖譜可以直接觀察到抗原抗體沉淀線,也可以用0.1%的氨基黑染色后觀察。如果需要保存可以拍照。