一、紫外分光光度計作用和組成部件
　　許多有機化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜，因此可用紫外分光光度法對有機物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測定．紫外分光光度法定量測定的依據(jù)是比耳定律。首先確定化合物的紫外吸收光譜，確定最大吸收波長。在選定的波長下，作出化合物溶液的工作曲線，根據(jù)在相同條件下測得待測液的吸光度值來確定待測液中化合物的含量。凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機化合物，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。可見-紫外分光光度計。其應(yīng)用波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū)、400～850nm的可見光區(qū)。紫外分光光度計主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成。

　　二、手動紫外分光光度計與自動紫外分光光度計的區(qū)別
　　手動紫外分光光度計是帶刻度盤顯示波長的，只能用手動調(diào)節(jié)波長大小。
　　自動紫外分光光度計是LCD或LED顯示波長的，通過設(shè)置鍵選擇需要的波長，再有馬達(dá)傳動走到設(shè)置的波長。

　　三、紫外分光光度計測定樣品步驟
　　1、首先，知道所需要測量物質(zhì)的特征吸收波長是多少，這個可在國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或方法。例如測量總氮的話，就需要220和275nm這2個波長，所以必須買紫外的光度計，并且最好帶雙波長測定功能，例如測總磷是697nm，只需買臺可見光度計就可以了。
　　2、第二步：知道所測量的物質(zhì)的實驗方法，需要哪些儀器和設(shè)備，還有玻璃器皿等，同時還有比較完成測量所需要的所有化學(xué)試劑等。這個可以在標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒灧椒ㄖ姓业�，基本在互�?lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測量方法。
　　3、第三步：配置好所需測量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液，一般是5~8個標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度建議從高到低，建議每個不同濃度貼上標(biāo)簽，以防順序搞錯。注意，部分實驗需要往標(biāo)準(zhǔn)溶液中加顯色劑之后才可以用光度計進(jìn)行測量。
　　4、第四步：設(shè)置好光度計的測量波長，這就需要熟悉光度計的基本操作，一般測量物質(zhì)的濃度都是用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，就是對應(yīng)光度計中的定量測量功能。具體操作時第一步，把儀器的波長調(diào)整到我們所需要的波長，例如測量總磷直接把波長走到697nm，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱的調(diào)零。第三部把標(biāo)準(zhǔn)溶液放入樣品室，依次測量他們的吸光度，儀器一般會自動記錄之后就會給出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，實驗完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之后用excel軟件進(jìn)行計算標(biāo)準(zhǔn)曲線。判斷做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否能用，看哪個R值即那個相關(guān)系數(shù)，一般最少做出0.999就可以用了，差一點的儀器也可以做出0.99.
　　5、第五步：把未知樣品放入樣品室就可以直接測量出樣品濃度。

　　四、紫外分光光度計連續(xù)測量一個樣品，沒拿出來出現(xiàn)吸收值下降原因
　　這是由于開始外壁上的溶液沒有擦干凈，需檢查一下儀器是否穩(wěn)定，是否存在儀器造成的基線漂移，如果是同一個比色皿沒有更換待測樣品溶液的話，便是儀器的問題，如果波動范圍為千分之幾的波動誤差，大可以忽略不計。另外，可在此波長下，用純水連續(xù)多次測定來觀測機器的穩(wěn)定性。有可能是儀器不太穩(wěn)定：1.儀器沒有事先預(yù)熱，不穩(wěn)定；2.光源已經(jīng)不行啦；3.聚集體隨著時間分解了，感覺不對路兩種可能：氘燈壽命出了問題；重新放入的樣如果不是一個容量瓶的話，建議做下溶液穩(wěn)定性試驗考慮是否是檢測器的問題，當(dāng)拿出樣品打開蓋光源遮住。