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實驗室儀器
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影響種子罐培養(yǎng)的主要因素介紹
[2017/4/14]
影響種子罐培養(yǎng)主要因素包括:營養(yǎng)條件,培養(yǎng)條件,染菌控制,擴培級數(shù)確定以及接種量的確定。
1培養(yǎng)基
培養(yǎng)基關系營養(yǎng)的獲取,對微生物的生長、繁殖、酶活性與產(chǎn)量均有直接影響。培養(yǎng)基可分為C/N基礎生長營養(yǎng),無機鹽滲透壓控制,微量元素維系組成,以及pH酶活性調(diào)節(jié)系統(tǒng)。
培養(yǎng)基的要求以組成簡單,來源豐富,價格便宜,取材方便為宜。
注:
A種子罐最后一級當與生產(chǎn)罐一致,此時前罐已建立發(fā)酵所需酶系,新環(huán)境條件下不需要重新構建;
B種子罐培養(yǎng)基應當增加N用量,且無機氮的增量比例要大一些;
C菌種進級之后由于設備差異(罐型、攪拌形式、轉速等),培養(yǎng)基配比需要重新根據(jù)實驗調(diào)整
2種齡、接種量
種齡要求:對數(shù)生長期移種,這是因為嫩種和老種轉罐后啟動速度均較慢,會導致發(fā)酵周期增加且產(chǎn)量低。
接種量:接種量影響新環(huán)境下的遲滯期長短,這是因為接種量伴隨細胞分裂繁殖所需的RNA等代謝物,此類物質(zhì)含量多可快速進入對數(shù)生長期,故接種量與新環(huán)境下的遲滯期成反比。
3溫度
前期看溫度,后期看溶氧。
任何微生物都有其最適溫度范圍,如下
生物學范圍內(nèi),每升高10℃,微生物生長速度可提升一倍,溫度直接影響細胞代謝酶系。
在最適范圍之內(nèi),提高對數(shù)生長期的前期的溫度有利于菌體的合成,對數(shù)生長期后期溶解氧對菌體合成速率影響更大,此時需要提升通氣量及攪拌等。
4 pH影響
陰離子(醋酸根,磷酸根)被吸收或氮源被利用后產(chǎn)NH3,使pH升;
陽離子(NH4+,K+)被吸收或有機酸積累使pH降;
高C培養(yǎng)基pH往低pH移動;
高N培養(yǎng)基pH往高pH移動。
調(diào)節(jié)pH三種方式:a酸堿溶液;b緩沖液;c緩沖劑(酸性或堿性鹽)
5通氣攪拌
通氣量、罐壓、攪拌共同決定了當前的溶氧狀態(tài),只有當溶解氧大于當前的BOD時,今天才能正常生長,移種之后菌體進入對數(shù)生長期,分裂繁殖速率指數(shù)增長,當此時應當交替調(diào)節(jié)通氣量和攪拌功率,以使DO達到菌體所需標準,一旦無法滿足菌體可適當降溫,降低菌體耗氧速率,此時菌體分裂生長效率降低但不至于缺氧畸形或自溶。
6種子罐級數(shù)確定
技術越少,越不易染菌,級數(shù)由菌種性質(zhì)確定,如生長速率,對數(shù)期菌體濃度,孢子的發(fā)育水平等,在不斷的優(yōu)化調(diào)試之后,應當盡可能減少擴培種子罐級數(shù),但需以不影響或較少影響生產(chǎn)罐遲滯期的增加及對數(shù)生長期生長速率為前提。