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樣品制備技術(shù)不過硬 電鏡儀器再好也沒用

[2015/6/9]

  “2015全國生物醫(yī)學(xué)農(nóng)林電鏡技術(shù)研討會(huì)暨生物電鏡前沿技術(shù)培訓(xùn)班”在浙江大學(xué)舉行。本次會(huì)議特別邀請(qǐng)了國內(nèi)外知名專家教授和電鏡工作者講授生物電子顯微鏡技術(shù)的最新發(fā)展,交流生物樣品制備和應(yīng)用方面的技術(shù)經(jīng)驗(yàn),并安排部分學(xué)員參加實(shí)驗(yàn)操作及演示。

  第二軍醫(yī)大學(xué)楊勇驥教授在研討會(huì)上做了題為“常規(guī)生物電鏡樣品制備”的報(bào)告,介紹了自己對(duì)于常規(guī)電鏡制樣技術(shù)的理解及應(yīng)用心得。

  楊勇驥表示:“電鏡技術(shù)是目前形態(tài)學(xué)分析的最高層次,電鏡的最終目標(biāo)就是獲得完美的照片,F(xiàn)今社會(huì)科研競(jìng)爭(zhēng)十分激烈,生物電鏡技術(shù)是理工醫(yī)綜合性最強(qiáng)、精細(xì)程度最高的應(yīng)用技術(shù)之一,是能夠真正體驗(yàn)到‘細(xì)節(jié)’決定成敗的一種特殊的技術(shù)方法。而生物電鏡又是一個(gè)不出活的技術(shù),因此必須要在電鏡工作中刻苦鉆研,才能有所成就!

  楊勇驥強(qiáng)調(diào)說,要想得到完美的電鏡照片,必須要有過硬的生物電鏡樣品制備技術(shù),否則哪怕是采用最高精尖的電鏡也得不到理想的結(jié)果。報(bào)告中楊勇驥比較了自己實(shí)驗(yàn)室里一臺(tái)使用了30年的電鏡和2009年采購的新型電鏡對(duì)同樣的樣品的觀察結(jié)果,結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用了30年的電鏡由于制樣好,觀察結(jié)果反而更好。

  生物樣品常規(guī)電鏡制樣包括:樣品取材、固定、脫水、浸透、包埋、修快、定位、超薄切片、電子染色等步驟。楊勇驥指出這么多環(huán)節(jié),任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)一點(diǎn)問題,整個(gè)制樣就失敗了。報(bào)告中他詳細(xì)的介紹了各個(gè)環(huán)節(jié)應(yīng)該注意的要點(diǎn),以及易犯的錯(cuò)誤。

  從楊勇驥的介紹中,我們體會(huì)到了生物電鏡制樣的要求是多么精細(xì)。就單拿超薄切片這一個(gè)步驟來說,要想獲得理想的切片效果,首先在切片時(shí)一定要有良好的心境,甚至要在自己心情比較好的時(shí)候才能來做這項(xiàng)工作。另外切片時(shí)要確保沒有人打擾,還要避免對(duì)切片機(jī)大聲咳嗽、打噴嚏等。切片的環(huán)境不能過于潮濕,否則會(huì)引起震顫。要選擇合適的切片速度。撈片時(shí)要選擇潔凈的、未氧化的、親水性良好的載網(wǎng)才能撈起完整的切片,所用載網(wǎng)如果放了幾天,已經(jīng)被氧化,就不要用來撈片了,同時(shí)注意用載網(wǎng)的正面撈片。另外,還有確保玻璃刀或鉆石刀的刀口平整。

  最終理想的超薄切片應(yīng)該是厚薄均一、無空洞、無震顫、無皺褶、無雜質(zhì)污染的連續(xù)切片,而且除了切片這個(gè)環(huán)節(jié),前期的取材、脫水、浸透、包埋、修快、定位與后期的染色等對(duì)切片效果的影響是環(huán)環(huán)相扣。

  最后,楊勇驥說道:“生物電鏡制樣技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)技術(shù)中最精細(xì)、最繁復(fù)的技術(shù)之一。生物電鏡工作者沒有教授與技術(shù)員之分,只有不斷實(shí)踐摸索技術(shù),精心總結(jié)經(jīng)驗(yàn),才能掌握這門技術(shù)的精髓,才能配合使用電鏡獲得理想精美的超微結(jié)構(gòu)圖像!


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