有些細(xì)胞在血液和組織中的含量很少但卻很重要，比如干細(xì)胞、循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞和殘留病變細(xì)胞。準(zhǔn)確檢測和分析這些稀有細(xì)胞，是理解疾病進程和發(fā)育機制的關(guān)鍵。然而稀有細(xì)胞檢測并不是一件容易的事，會受到樣本質(zhì)量等多種因素的影響。

　　流式細(xì)胞技術(shù)能對每個細(xì)胞進行多種定量分析，是在血液、骨髓等組織中檢測稀有細(xì)胞的有力工具。稀有細(xì)胞檢測往往需要大量樣本才能采集到足夠的數(shù)據(jù)，這個時候傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀也有些發(fā)怵，因為大樣本意味著處理時間長，如果不想犧牲檢測靈敏度，就不能貿(mào)然加快進樣速率。

　　聲波聚焦技術(shù)，不做任何無謂的犧牲

　　樣本溶液注射到流式細(xì)胞儀的時候，細(xì)胞是隨機分布在三維空間內(nèi)的。讓這些細(xì)胞逐個穿過激光束，對于準(zhǔn)確采集數(shù)據(jù)非常重要。絕大多數(shù)流式細(xì)胞儀通過快速流動的鞘液實現(xiàn)這一點。鞘液帶動細(xì)胞并將其限制在中心位置，進而建立單細(xì)胞流，這一過程稱為水動力聚焦。

　　與傳統(tǒng)水動力聚焦不同的是，聲波聚焦技術(shù)利用超聲波將細(xì)胞緊密聚集在樣本流中間，匯聚成一條直線。這種超聲波大于2 MHz，與醫(yī)學(xué)成像中的超聲波類似。聲波聚焦流式細(xì)胞儀基本不受進樣速率的影響，能使細(xì)胞強聚焦于激光檢測點，與樣本-鞘液的比率無關(guān)。

　　不犧牲通量和精度

　　傳統(tǒng)的水動力聚焦技術(shù)受到了不少限制。流速提高會增大樣本流的寬度，使細(xì)胞的聚焦效果下降。細(xì)胞偏離激光中心越遠，激發(fā)光強度變化就越大，CV值也越高。研究人員經(jīng)常需要在分析通量和精度之間尋求平衡。

　　聲波聚焦技術(shù)在很大程度上與進樣流速無關(guān)，不論樣本流與鞘液流的比例如何，都能使細(xì)胞緊密地聚集于激光檢測焦點，避免分散。這樣可以采集更多光子，在極高的樣本通量下保證高精度分析。

　　聲波聚焦流式細(xì)胞儀在高達1 mL/min的進樣速率下也能維持精確聚焦，讓研究人員能夠獲得更小的CV值，更好地鑒別弱陽性信號和背景，實現(xiàn)更小的差異和更好的信號分離。

　　不犧牲檢測速度稀有細(xì)胞檢測一般需要采集大量細(xì)胞，才能獲得準(zhǔn)確而可靠的結(jié)果。在這種情況下，傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀需要很長的處理時間。不過，聲波聚焦流式細(xì)胞儀的樣本運行速率非常快(可達1,000μL /min)，每次運行可采集2000萬個細(xì)胞。這么高的樣本采集速率和樣本量可以幫助人們快速準(zhǔn)確地檢測稀有細(xì)胞，不會影響數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

　　不犧牲珍貴樣本樣本制備對稀有細(xì)胞檢測有很大的影響。舉例來說，洗脫和裂解紅細(xì)胞(RBC)會造成嚴(yán)重的細(xì)胞損失和損傷。聲波聚焦流式細(xì)胞儀支持無洗脫、無裂解的流式實驗方案，可以最大程度的保留珍貴樣本，避免不必要的細(xì)胞損失，簡化樣本制備步驟。

　　研究人員可以通過有目的地稀釋樣本來取代洗脫和裂解步驟，快速而有效地分析濃度較低的樣本，比如腦脊液(CSF)、干細(xì)胞以及細(xì)胞數(shù)量較少的稀釋樣本。對于小鼠血液、骨髓等難以采集的樣本、細(xì)針抽吸樣本或低細(xì)胞產(chǎn)量樣本，研究人員可以直接染色和稀釋，無需洗脫或紅細(xì)胞裂解。

　　值得一提的是，聲波聚焦流式細(xì)胞儀處理全血樣本可省去樣本制備，既沒有樣本損失，也不會影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。

　　選擇流式細(xì)胞儀需要知道的事

　　近三十年來，流式細(xì)胞儀已經(jīng)成為科研和臨床領(lǐng)域不可或缺的重要工具。不論你是不是第一次購買流式細(xì)胞儀，入手一個新平臺都需要考慮很多因素。為了找到最適合自己的那一款，我們需要了解一些事：

　　流式細(xì)胞儀主要由三個部分組成：液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)。液流系統(tǒng)將顆�；蚣�(xì)胞送給激光束進行檢測。光學(xué)系統(tǒng)負(fù)責(zé)照明并將光信號引導(dǎo)到適當(dāng)?shù)臋z測器。而電子系統(tǒng)將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娔X可以處理的電信號。

　　檢測參數(shù)同時檢測多種細(xì)胞參數(shù)，是流式細(xì)胞儀的一大優(yōu)勢。我們在選擇流式細(xì)胞儀時一定要明確自己對參數(shù)的需求。因為一次實驗?zāi)軝z測多少參數(shù)，取決于流式細(xì)胞儀配備的激光器和檢測器。比如Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀采用模塊化設(shè)計，能夠配置多達4種激光和14色熒光檢測，適用于多參數(shù)分析。

　　檢測性能了解流式細(xì)胞儀的靈敏度、分辨率、動態(tài)范圍、檢測能力和檢測速度，可以幫助我們縮小選擇范圍。購買流式細(xì)胞儀是一筆不小的投資，我們不僅需要認(rèn)清目前的研究需求，還應(yīng)全面考慮到未來幾年的應(yīng)用。

　　樣本類型現(xiàn)在絕大多數(shù)流式細(xì)胞儀都能處理幾微升到幾百微升的樣本。如果細(xì)胞非常稀少，我們就需加大樣本量同時盡量避免細(xì)胞損失。在這種情況下，Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀將是不錯的選擇。這種流式細(xì)胞儀特別適用于稀少細(xì)胞和珍貴樣本的檢測。

　　系統(tǒng)軟件流式細(xì)胞儀用起來順不順手，在很大程度上取決于其系統(tǒng)軟件。除了方便性以外，我們還需要了解軟件是否能呈現(xiàn)我們所需的數(shù)據(jù)，以及可不可以定時更新升級。Attune的采集和分析軟件很直觀而且功能強大，適合各種經(jīng)驗水平的用戶。

　　實驗室空間每一個實驗室的空間都是有限的，越來越緊湊正是流式細(xì)胞儀的發(fā)展趨勢。Attune聲波聚焦流式細(xì)胞儀就是這樣一種小巧方便的臺式設(shè)備。

　　除此之外，購買流式細(xì)胞儀之前我們還需要了解多方面的信息，比如儀器的自動化程度，廠家提供的技術(shù)支持和培訓(xùn)，儀器的兼容性和可拓展性等等。