食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定

　　中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

　　食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) GB 4789.2-94

　　菌落總數(shù)測(cè)定

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　　1 主題內(nèi)容與適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測(cè)定方法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。

　　2 術(shù)語

　　菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下培養(yǎng)后(如培基成分、培養(yǎng)溫度和時(shí)

　　間、pH、需氧性質(zhì)等),所得1mL(g)檢樣中所含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所

　　得結(jié)果,只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。

　　菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標(biāo)志,也可以應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食

　　品中繁殖的動(dòng)態(tài),以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。

　　3 引用標(biāo)準(zhǔn)

　　GB 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 染色法、培養(yǎng)基和試劑

　　4 設(shè)備和材料

　　4.1 溫箱：36±1℃。

　　4.2 冰箱：0～4℃。

　　4.3 恒溫水浴：46±1℃。

　　4.4 天平。

　　4.5 電爐。

　　4.6 吸管。

　　4.7 廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。

　　4.8 玻璃珠：直徑約5mm。

　　4.9 平皿：直徑為90mm。

　　4.10 試管。

　　4.11 放大鏡。

　　4.12 菌落計(jì)數(shù)器。

　　4.13 酒精燈。

　　4.14 均質(zhì)器或乳缽。

　　4.15 試管架。

　　4.16 滅菌刀或剪子。

　　4.17 滅菌鑷子。

　　5 培養(yǎng)基和試劑

　　5.1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按GB 4789.28中4.7規(guī)定。

　　5.2 磷酸鹽緩沖稀釋液：按GB 4789.28中3.22規(guī)定。

　　5.3 生理鹽水。

　　5.4 75%乙醇。

　　6 檢驗(yàn)程序

　　菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序如下。

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　　│ 檢 樣 │

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　　│ 做成幾個(gè)適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液 │

　　└─────────────┘

　　↓

　　┌──────────────┐

　　│ 選擇2～3個(gè)適宜稀釋度 │

　　│ 各以1mL分別加入滅菌平皿內(nèi) │

　　└──────────────┘

　　↓

　　┌─────────────┐

　　│ 每皿內(nèi)加入適量營養(yǎng)瓊脂 │

　　└─────────────┘

　　36±1℃ ↓ 48±2h

　　┌─────┐

　　│ 菌落計(jì)數(shù) │

　　└─────┘

　　↓

　　┌──────┐

　　│ 報(bào) 告 │

　　└──────┘

　　7 操作步驟

　　7.1 檢樣稀釋及培養(yǎng)

　　7.1.1 以無菌操作,將檢樣25g(或mL)剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的

　　滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1∶10

　　的均勻稀釋液。

　　固體檢樣在加入稀釋液后,最好置均質(zhì)器中以8 000～10 000r/min的速度處理1min,

　　做成1∶10的均勻稀釋液。

　　7.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水或其

　　他稀釋液的試管內(nèi)(注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液),振搖試管,混合均勻,做成1∶10

　　0的稀釋液。

　　7.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作順序,做10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次,

　　即換用1支1mL滅菌吸管。

　　7.1.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計(jì),選擇2～3個(gè)適宜稀釋度,分別

　　在做10倍遞增稀釋的同時(shí),即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi),每個(gè)稀

　　釋度做兩個(gè)平皿。

　　7.1.5 稀釋液移入平皿后,應(yīng)及時(shí)將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46±1℃水浴保

　　溫)注入平皿約15mL,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋

　　液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。

　　7.1.6 待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。

　　7.2 菌落計(jì)數(shù)方法

　　做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí),可用肉眼觀查,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏。在記下各平板

　　的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

　　7.3 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告

　　7.3.1 平板菌落數(shù)的選擇

　　選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平

　　板,應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù),其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以

　　無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù),若片狀菌落不到平板的一半,而其余一

　　半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀

　　菌落生長時(shí)(菌落之間無明顯界線),若僅有一條鏈,可視為一個(gè)菌落;如果有不同來源

　　的幾條鏈,則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。

　　7.3.2 稀釋度的選擇

　　7.3.2.1 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表中例1)。

　　7.3.2.2 若有兩個(gè)稀釋度,其生長的菌落數(shù)均在30～300之間,則視兩者之比如何來決定。

　　若其比值小于或等于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù);若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字(見表中例2及

　　3)。

　　7.3.2.3 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以

　　釋稀倍數(shù)報(bào)告之(見表中例4)。

　　7.3.2.4 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀

　　釋倍數(shù)報(bào)告之(見表中例5)。

　　7.3.2.5 若所有稀釋度均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表中例6)。

　　7.3.2.6 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間,其中一部分大于300或小于30

　　時(shí),則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見表中例7)。

　　7.3.3 菌落數(shù)的報(bào)告

　　菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí),按其實(shí)有數(shù)報(bào)告,大于100時(shí),采用二位有效數(shù)字,在二位有效

　　數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù),也可用10的指數(shù)來

　　表示(見表中“報(bào)告方式”欄)。

　　稀釋度選擇及菌落數(shù)報(bào)告方式

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　　│ 稀釋液及菌落數(shù) │ │菌落總數(shù)│ 報(bào)告方式

　　例次├────┬────┬───┤兩稀釋液之比│個(gè)/g或mL│ 個(gè)/g或mL

　　│ 10-1 │ 10-2 │ 10-3 │ │ │

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　　1 │多不可計(jì)│ 164 │ 20 │ - │ 16 400 │16 000或1.6×10**4

　　2 │多不可計(jì)│ 295 │ 46 │ 1.6 │ 37 750 │3 8000或3.8×10**4

　　3 │多不可計(jì)│ 271 │ 60 │ 2.2 │ 27 100 │27 000或2.7×10**4

　　4 │多不可計(jì)│多不可計(jì)│ 313 │ - │ 313 000│31 000或3.1×10**5

　　5 │ 27 │ 11 │ 5 │ - │ 270 │270或2.7×10**2

　　6 │ 0 │ 0 │ 0 │ - │ <1×10│ <10

　　7 │多不可計(jì)│ 305 │ 12 │ - │ 30 500│31 000或3.1×10**4

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　　附加說明：

　　本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。

　　本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)起草。

　　本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉宏道。

　　本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)解釋。