(一) H2SO4-H2O2消煮法

　　1 適用范圍

　　本方法不包括硝態(tài)氮的植物全氮測定，適合于含硝態(tài)氮低的植物樣品的測定。

　　2 方法提要

　　植物中的氮、磷大多數(shù)以有機(jī)態(tài)存在，鉀以離子態(tài)存在。樣品經(jīng)濃H2SO4和氧化劑H2O2消煮，有機(jī)物被氧化分解，有機(jī)氮和磷轉(zhuǎn)化成銨鹽和磷酸鹽，鉀也全部釋出。消煮液經(jīng)定容后，可用于氮、磷、鉀等元素的定量。采用H2O2為加速消煮的氧化劑，不僅操作手續(xù)簡單快速，對氮、磷、鉀的定量沒有干擾，而且具有能滿足一般生產(chǎn)和科研工作所要求的準(zhǔn)確度。但要注意遵照操作規(guī)程的要求操作，防止有機(jī)氮被氧化成N2氣或氮的氧化物而損失。

　　3 試劑

　　(1)硫酸(化學(xué)鈍，比重1.84);

　　(2)30% H2O2 (分析純)[1]。

　　4 主要儀器設(shè)備

　　消煮爐

　　定氮蒸餾器

　　5 操作步驟

　　稱取植物樣品(0.5mm)0.3～0.5g(2)(稱準(zhǔn)至0.0002g)裝入100ml開氏瓶或消煮管的底部，加濃H2SO4 5ml，搖勻(最好放置過夜)，在電爐或消煮爐上先小火加熱，待H2SO4發(fā)白煙后再升高溫度，當(dāng)溶液呈均勻的棕黑色時取下。稍冷后加10滴H2O2(3)，再加熱至微沸，消煮約7～10min，稍冷后重復(fù)加H2O2，再消煮。如此重復(fù)數(shù)次，每次添加的H2O2應(yīng)逐次減少，消煮至溶液呈無色或清亮后，再加熱約10min，除去剩余的H2O2。取下冷卻后，用水將消煮液無損地轉(zhuǎn)移入100ml容量瓶中，冷卻至室溫后定容(V1)。用無磷鉀的干濾紙過濾，或放置澄清后吸取清液測定氮、磷、鉀。每批消煮的同時，進(jìn)行空白試驗(yàn)，以校正試劑和方法的誤差。

　　6 注釋

　　6.1 所用的H2O2應(yīng)不含氮和磷。H2O2在保存中可能自動分解，加熱和光照能促使其分解，故應(yīng)保存于陰涼處。在H2O2中加入少量H2SO4酸化，可防止H2O2分解。

　　6.2 稱樣量決定于NPK含量，健狀莖葉稱0.5g，種子0.3g，老熟莖葉可稱1g，若新鮮莖葉樣，可按干樣的5倍稱樣。稱樣量大時，可適當(dāng)增加濃H2SO4用量。

　　6.3 加H2O2時應(yīng)直接滴入瓶底液中，如滴在瓶頸內(nèi)壁上，將不起氧化作用，若遺留下來還會影響磷的顯色。

　　(二)水楊酸-鋅粉還原-H2SO4-加速劑消煮法

　　1 適用范圍

　　包括硝態(tài)氮的植物全氮測定，適合于硝態(tài)氮含量較高的植物樣品的測定。

　　2 方法原理

　　樣品中的硝態(tài)氮在室溫下與硫酸介質(zhì)中的水楊酸作用，生成硝基水楊酸，再用硫代硫酸鈉及鋅粉使硝基水楊酸還原為氨基水楊酸。然后按H2SO4-加速劑消煮法(見土壤全氮測定)進(jìn)行消煮樣品，使樣品中全部氮轉(zhuǎn)化為銨鹽。

　　3 試劑

　　3.1固體Na2S2O3;

　　3.2還原鋅粉(AR);

　　3.3水楊酸-硫酸:30g水楊酸溶于1L濃硫酸中。也可以該用含苯酚的濃硫酸：40g苯酚溶于1L濃硫酸中。

　　4 儀器設(shè)備

　　同上。

　　5 操作步驟

　　稱取磨細(xì)烘干樣品(過0.25mm篩)0.1000～0.2000g或新鮮莖葉樣品1.000～2.000g,置于100mL開氏瓶或消煮管中，先用水濕潤瓶內(nèi)樣品(烘干樣)，然后加水楊酸-硫酸10mL,搖勻后室溫放置30min，加入Na2S2O3約1.5g，鋅粉0.4g和水10mL,放置10min,待還原反應(yīng)完成后，加入混合加速劑2g，按土壤全氮測定方法進(jìn)行消煮，消煮完畢，取下冷卻后，用水將消煮液無損地轉(zhuǎn)移入100ml容量瓶中，冷卻至室溫后定容(V1)。用干濾紙過濾，或放置澄清后吸取清液測定氮。每批消煮的同時，進(jìn)行空白試驗(yàn)，以校正試劑和方法的誤差。

　　(三)植物全氮的測定

　　(半微量蒸餾法)

　　1 適用范圍

　　適合于各種植物樣品消煮液中氮的定量。

　　2 方法原理

　　植物樣品經(jīng)開氏消煮、定容后，吸取部分消煮液堿化，使銨鹽轉(zhuǎn)變成氨，經(jīng)蒸餾，用H3BO3吸收，硼酸中吸收的氨可直接用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定，以甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑指標(biāo)終點(diǎn)。

　　3 試劑

　　(1)400g/L NaOH溶液;

　　(2)20g/L H3BO3-指示劑溶液;

　　(3)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液〔c(HCl或1/2H2SO4)=0.01mol/L〕

　　4 儀器設(shè)備

　　5 蒸餾

　　檢查蒸餾裝置是否漏氣和管道是否潔凈后，吸取定容后的消煮液5.00～10.00mL(V2，含NH4-N約1mg)，注入半微量蒸餾器的內(nèi)室。另取150ml三角瓶，內(nèi)加5ml 2% H3BO3-指示劑溶液，放在冷凝管下端，管口置于H3BO3液面以上3～4cm處，然后向蒸餾器內(nèi)慢慢加入約3mL 400g/L NaOH溶液(若為包括硝態(tài)氮的待測液，應(yīng)加約6mL的400g/L NaOH溶液)，通入蒸氣蒸餾(注意開放冷凝水，勿使餾出液的溫度超過40℃)。待餾出液體積約達(dá)50～60mL時，停止蒸餾，用少量已調(diào)節(jié)至pH4.5的水沖洗冷凝管末端。用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定餾出液至由藍(lán)綠色突變?yōu)樽霞t色(終點(diǎn)的顏色應(yīng)和空白測定的滴定終點(diǎn)相同)。與此同時進(jìn)行空白測定的蒸餾、滴定，以校正試劑和滴定誤差。

　　6 結(jié)果計算：

　　ω(N)，%=c(V-V0)×0.014×100/(m×V2/V1);

　　式中:ω(N)——植物全氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%;

　　c——酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L;

　　V——滴定試樣所用的酸標(biāo)準(zhǔn)液體積，mL;

　　V0——滴定空白所用的酸標(biāo)準(zhǔn)液，mL;

　　0.014——N的摩爾質(zhì)量，kg/mol;

　　m——稱樣量，g;

　　V1——消煮液定容體積，mL;

　　V2——吸取測定的消煮液體積，mL。