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免疫組化實驗操作

[2013/8/1]

  免疫組化實驗操作

  60℃烤片2小時

  脫蠟。二甲苯脫蠟15分鐘,三次

  水化。依次經過無水乙醇、95%、90%、80%、70%,各2分鐘,蒸餾水(或自來水)5分鐘

  PBS洗5分鐘,三次

  3%雙氧水封閉20分鐘,PBS洗5分鐘,三次

  抗原修復。枸櫞酸緩沖液(約92-95℃)煮沸(沸水浴)修復15分鐘,自然涼至室溫。PBS洗5分鐘,三次

  正常山羊血清封閉,37℃15-20分鐘

  一抗孵育,4℃過夜.

  復溫20分鐘,PBS洗5分鐘,三次

  二抗孵育,37℃20分鐘(二抗為生物素標記的羊抗兔IgG),PBS洗5分鐘,三次

  三抗孵育,37℃20分鐘(三抗為辣根酶標記的鏈酶親和素),PBS洗5分鐘,三次

  DAB顯色,鏡下觀察結果,適時終止

  蘇木素復染5分鐘,自來水沖洗片刻,75%的鹽酸酒精溶液分化30秒,自來水沖洗5分鐘藍化

  脫水。依次經過70%、80%、90%、95%、無水乙醇,各2分鐘,二甲苯15分鐘,三次

  封片,中性樹膠封片