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各種細(xì)胞免疫檢測(cè)方法比較

[2014/8/4]

類型 檢測(cè)名稱 檢測(cè)方法 主要特點(diǎn)
體內(nèi)功能檢驗(yàn) 遲發(fā)型超敏反應(yīng)法 皮下注射抗原或者負(fù)載抗原的DC，觀察紅斑、硬塊的發(fā)生與大小 優(yōu)點(diǎn)：體內(nèi)功能性檢驗(yàn)，相對(duì)比較容易操作；
缺點(diǎn)：只是一種初篩，加陽(yáng)性與假陰性比較嚴(yán)重。
體外表型檢測(cè) TCR可變區(qū)分析法 使用針對(duì)T細(xì)胞受體（TCR）可變區(qū)的流式抗體來(lái)對(duì)表達(dá)特定可變區(qū)的T細(xì)胞計(jì)數(shù) 優(yōu)點(diǎn)：可以提供關(guān)于可變區(qū)使用的群體分布；
缺點(diǎn)：識(shí)別同一種抗原的TCR的可變區(qū)可能不相同；單抗不夠豐富，不能檢測(cè)所有種類的可變區(qū)。
多肽MHC四聚體法（Tetramer） 用熒光標(biāo)記的MHC-肽四聚體去結(jié)合T細(xì)胞，進(jìn)而做流式分析 優(yōu)點(diǎn)：能做精細(xì)分析，靈敏較高；
缺點(diǎn)：只能分析MHC-I類分子，四聚體制備復(fù)雜，成本高昂，需要預(yù)先合成T細(xì)胞表位肽。
TCR CDR3序列分析 用PCR的方法擴(kuò)增T細(xì)胞受體互補(bǔ)決定區(qū)3的序列，測(cè)序 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單靈敏，但還不能用于群體分析；
該方法目前剛剛開(kāi)展，還不能全面評(píng)價(jià)。
體外功能檢測(cè) 細(xì)胞因子ELISPOT法 抗原與待測(cè)PBMC混合，通過(guò)ELISPOT檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞頻率 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度最高，單細(xì)胞水平，特異性強(qiáng)，結(jié)果直觀可信，成本低，高通量；
缺點(diǎn)：血液PBMC的分離還未實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化；還有待于發(fā)展雙因子、多因子ELISPOT技術(shù)。
淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H胸苷摻入法） 待測(cè)PBMC、輻射過(guò)的APC、抗原混合孵育，特異性的T細(xì)胞增殖，通過(guò)摻入的3H胸苷來(lái)確定增殖水平 優(yōu)點(diǎn)：是傳統(tǒng)方法，研究比較透徹；
缺點(diǎn)：需要放射性操作，非特異性反應(yīng)比較強(qiáng)，并且靈敏度低。
細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法 抗原與待測(cè)PBMC混合，把細(xì)胞因子保留在細(xì)胞內(nèi)，然后用流式抗體染色、計(jì)數(shù) 優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)渭?xì)胞水平，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)參數(shù)、多種因子；
缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，靈敏度相對(duì)較低，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。
細(xì)胞因子ELISA法 抗原與待測(cè)PBMC混合，然后用定量ELISA法測(cè)量細(xì)胞受刺激而分泌到上清液中的細(xì)胞因子濃度 優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，可以對(duì)細(xì)胞因子濃度定量，有以全血作為檢測(cè)樣品的潛力；
缺點(diǎn)：只能做群體水平檢測(cè)，靈敏度不夠高。
細(xì)胞因子mRNA定量法 通過(guò)定量RT-PCR方法檢測(cè)受刺激的細(xì)胞中細(xì)胞因子mRNA的水平 優(yōu)點(diǎn)：有利用各種組織樣品的潛力，靈敏度高，高通量；
缺點(diǎn)：容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，只能做群體水平檢測(cè)。
CTL殺傷法（51Cr釋放法） 制備51Cr標(biāo)記的表達(dá)抗原的靶細(xì)胞，與待測(cè)PBMC混合，通過(guò)51Cr釋放來(lái)確定靶細(xì)胞被殺傷的水平 優(yōu)點(diǎn)：最直接的功能性檢測(cè)；
缺點(diǎn)：靶細(xì)胞制備困難，試驗(yàn)周期長(zhǎng)，需要放射性操作，靈敏度低。
極限稀釋計(jì)數(shù)CTL法 待測(cè)PBMC稀釋到一系列孔中，體外增殖，然后加入靶細(xì)胞判定每孔裂解的陰陽(yáng)性，最后通過(guò)泊松統(tǒng)計(jì)法確定CTL極限稀釋倍數(shù) 優(yōu)點(diǎn)：對(duì)CTL的頻率計(jì)數(shù)比直接CTL殺傷法更準(zhǔn)確，靈敏度也有所提高；
缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)及其復(fù)雜，工作量極大，并且因?yàn)橛行〤TL前體細(xì)胞不能增值而導(dǎo)致結(jié)果偏低。